СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ДНК-МЕМБРАННЫХ СИСТЕМ ЭУКАРИОТ ПРИ СТАРЕНИИ
Круглова Н. Л.
Институт биофизики клетки РАН, 142292 Пущино
Работу проводили на лейкоцитах
крови и селезёнке крыс линии "Вистар" с начальной массой
50-6О г. Препараты ДНК-мембранной системы получали из суспензии
клеток при помощи мягкой фенольной экстракции без гидродинамики
и нуклеазной деградации по методу Стражевской и др. (1974). Водорастворимая
фракция ДНК-мембранного комплекса содержала: 95% всей ядерной
ДНК, 5-7% РНКазоустойчивой РНК, а также 3-5% остаточного кислого
белка и 3-5% липидов ядерной мембраны. Об эффектах судили по ряду
показателей: изменению эластовязкости и характеристической вязкости
ДНК-систем, содержанию РНК и НГБ в ДНК-системах, по КД-спектрам
и электронным спектрам поглощения, по изменению в теплоемкости.
Со второго месяца развития животного установлен факт перераспределения
в ДНК-мембранной системе содержания ДНК, РНК, остаточного негистонового
кислого белка. Количество сильносвязанной с комплексом РНК резко
снижалось к 5-6 месяцам, что указывает на снижение транскрипционной
активности ДНК-матрицы. Количество специфически ассоциированного
кор-фермента РНК-полимеразы II с ДНК-матрицей также уменьшалось.
В электронных спектрах поглощения обнаружен сдвиг максимумов с
268 нм - исходная ДНК система до 260 нм и 255 нм- для ДНК
системы из 6- и 8-месячных животных, соответственно, что говорит
об изменении окружения двойной спирали ДНК в комплексе. Показано
постепенное снижение в максимуме положительной полосы в КД-спектрах
к 6, 8, 12 и 14 месяцам. Показано существенное снижение скачка
теплоемкости в интервале температур 18-65°С в границах от 350
кдж/кг.град до 50-70 кдж/кг.град. Установлено, что наблюдаемое
изменение в теплоёмкости не обусловлено внутримолекулярным плавлением
отдельных компонент системы, а связано с ее межмолекулярными перестройками.
Основной вклад в этот эффект вносит негистоновый кислый белок,
в состав которого входит РНК-полимераза II,
индуцирующая, по-видимому, в сочетании с липидами структурные
переходы в ДНК-матрице.