СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ДНК-МЕМБРАННЫХ СИСТЕМ ЭУКАРИОТ ПРИ СТАРЕНИИ

Круглова Н. Л.
Институт биофизики клетки РАН, 142292 Пущино
Работу проводили на лейкоцитах крови и селезёнке крыс линии "Вистар" с начальной массой 50-6О г. Препараты ДНК-мембранной системы получали из суспензии клеток при помощи мягкой фенольной экстракции без гидродинамики и нуклеазной деградации по методу Стражевской и др. (1974). Водорастворимая фракция ДНК-мембранного комплекса содержала: 95% всей ядерной ДНК, 5-7% РНКазоустойчивой РНК, а также 3-5% остаточного кислого белка и 3-5% липидов ядерной мембраны. Об эффектах судили по ряду показателей: изменению эластовязкости и характеристической вязкости ДНК-систем, содержанию РНК и НГБ в ДНК-системах, по КД-спектрам и электронным спектрам поглощения, по изменению в теплоемкости. Со второго месяца развития животного установлен факт перераспределения в ДНК-мембранной системе содержания ДНК, РНК, остаточного негистонового кислого белка. Количество сильносвязанной с комплексом РНК резко снижалось к 5-6 месяцам, что указывает на снижение транскрипционной активности ДНК-матрицы. Количество специфически ассоциированного кор-фермента РНК-полимеразы II с ДНК-матрицей также уменьшалось. В электронных спектрах поглощения обнаружен сдвиг максимумов с 268 нм - исходная ДНК система до 260 нм и 255 нм- для ДНК системы из 6- и 8-месячных животных, соответственно, что говорит об изменении окружения двойной спирали ДНК в комплексе. Показано постепенное снижение в максимуме положительной полосы в КД-спектрах к 6, 8, 12 и 14 месяцам. Показано существенное снижение скачка теплоемкости в интервале температур 18-65°С в границах от 350 кдж/кг.град до 50-70 кдж/кг.град. Установлено, что наблюдаемое изменение в теплоёмкости не обусловлено внутримолекулярным плавлением отдельных компонент системы, а связано с ее межмолекулярными перестройками. Основной вклад в этот эффект вносит негистоновый кислый белок, в состав которого входит РНК-полимераза II, индуцирующая, по-видимому, в сочетании с липидами структурные переходы в ДНК-матрице.