ТОПОЛОГИЧЕСКАЯ ГЕТЕРОГЕННОСТЬ ДНК В ЛЕЙКОЦИТАХ И ФИБРОБЛАСТАХ ЧЕЛОВЕКА

Сигора Г. А., Папонов В. Д.
Медико-генетический научный центр РАМН, 115478 Москва
Для доказательства топологической гетерогенности петельных участков ДНК в клетках человека использовали вискозиметрическое титрование бромидом этидия нуклеоидов в клеточных лизатах. С помощью ротационного вискозиметра обнаружили неравновесное поведение клеточных лизатов в традиционно используемых лизирующих системах, которое может быть обусловлено диспергированием в поле сдвига клеточных субструктур и ферментативной активностью. Для получения стабильной во времени дисперсии нуклеоидов из клеток человека предложили следующий состав лизирующей смеси: 0,15 M NaCl + 1 мМ фенилметилсульфонилфторида + 0,5 % тритон Х-100 + гепарин (нуклеиновые кислоты/гепарин = 1/200) + 0,0025 М Na2HPO4 + 0,0175 M NaH2PO4, рН 6,0. Кривые титрования ДНК лейкоцитов и фибробластов в таких смесях оказались строго воспроизводимыми по положению максимумов вязкости. Показано, что экстремальный характер кривых титрования не проявляется на лизирующей смеси и на смеси диссоциировавших от нуклеоидов компонентов в лизирующей клетки среде. Это доказывает, что ответственным за экстремальный характер кривых титрования клеточных лизатов является ДНК нуклеоидов, подвергающаяся изменению знака закрутки суперспирали при добавлении интеркалятора. Выделение на кривых титрования до 13 максимумов вязкости позволяет говорить о существовании по крайней мере 13 семейств петель ДНК с различной степенью суперспирализации в исследованных клетках человека. Выявлены статистически достоверные различия в характере суперспирализации некоторых семейств петель ДНК в клетках лейкоцитов и фибробластов.