МОДЕЛЬ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ: ДИФФУЗИОННЫЕ ОГРАНИЧЕНИЯ
Нетребко А. В., Кроо С. В., Романовский Ю. М.
НИИ механики МГУ им. М.В. Ломоносова, 119899 Москва; Физический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, 119899 Москва
Фермент АХЭ относится
к классу сериновых гидролаз и является катализатором реакции расщепления
нейромедиатора - ацетилхолина (АХ) на холин (Х) и ацетат (А).
Гантелеобразная молекула АХ (размеры 3 Е х 7,5 Е) несет на себе
положительный заряд q@+1e, а продукты реакции имеют заряды q1
@+1e (Х) и q2@ -1e (А). Высокая скорость работы АХЭ
(одна молекула АХЭ способна гидролизовать до 10 молекул АХ за
1мс) определяется специальной организацией активного центра (АЦ).
Каталитическая триада (КТ) His440, Ser200,
Glu327 расположена в глубоком кармане АЦ, имеющем форму
усеченного конуса (радиус входа - 14 Е, радиус дна - 7 Е, высота
- 21 Е). Большой электрический момент в 1500 D создается зарядами
групп, выстилающих внутреннюю поверхность кармана АЦ. Электростатическое
поле АХЭ способствует быстрой диффузии молекул АХ из пространства
щели между синапсом и телом клетки-мишени в область, прилегающую
ко входу в АЦ. Ранее предложена гипотеза о существовании "запасной
двери" (ЗД) (остаток TRP84), открытие которой
существенно увеличивает скорость реакции V. На основе Protein
Data Bank нами выделены продольные и поперечные слои в модели
молекулы АХЭ, которые включают КТ, предполагаемую ЗД, остатки,
формирующие входную щель АЦ. Оказалось возможным также вычислить
2D и 3D потенциальные рельефы в АЦ и снаружи молекулы АХЭ, определенные
на основе данных о зарядах аминокислотных остатков и Ван-дер-Ваальсовых
радиусов атомных групп, выстилающих внутреннюю поверхность кармана
АЦ и внешнюю поверхность, при различных ионных силах водного раствора.
Потенциальный барьер, который необходимо преодолеть положительно
заряженному Х для обратного выхода из ущелья, составляет 1,5ё2
kT, а через полностью открытую ЗД - около 2 kT. По этой причине
основными препятствиями для входа АХ в карман АЦ и выхода продуктов
наружу являются встречные движения и столкновения АХ, Х, и А друг
с другом. Методом математического моделирования описаны отдельные
этапы работы АХЭ и показано следующее: а) избыток АХ гантелей
на входе АЦ и взаимодействие молекул АХ, А иХ приводит к диффузионному
ограничению V, несмотря на учет флюктуаций ширины щели; б) без
учета ЗД максимальная V недостижима; в) колебания молекулы АХ,
связанной с КТ, благодаря нелинейному резонансу между модами способствует
увеличению V; г) учет большого ионного напряжения, при котором
действует АХЭ in vivo, приводит к существенным поправкам
при расчетах скорости V. Работа поддержана грантами РФФИ, Центра
фундаментального естествознания Минобразования РФ и грантом "Научные
школы России" № 96-15-97782.