ВЫДЕЛЕНИЕ И ПОРООБРАЗУЮЩИЕ СВОЙСТВА БЕЛКОВ НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ МОРСКИХ БАКТЕРИЙ РОДА PSEUDOALTEROMONAS

Хоменко В. А., Лихацкая Г. Н., Фролова Г. М., Романенко Л. А., Соловьева Т. Ф.
Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН, 690022 Владивосток
Особенности среды обитания морских бактерий предполагают различия в структуре и свойствах "морских" поринов по сравнению с поринами наземных микроорганизмов. Для порин-подобных белков морских бактерий рода Vibrio и Photobacterium в литературе отмечены необычные характеристики. Мы исследовали белки наружных мембран морских бактерий рода Pseudoalteromonas (P. haloplanktis, P. tetraodonis и дикого штамма КММ 223). Для выделения фракции наружной мембраны использовали последовательную экстракцию микробных клеток 0,5М растворами хлористого натрия и сахарозы с последующим дифференциальным центрифугированием. Как показали наши эксперименты, для морских бактерий использование метода Розенбуша, обычно применяемого для выделения поринов из наземных микроорганизмов, оказалось неприемлемым. По данным ДСН-ПААГ-электрофореза в состав наружных мембран входят термолабильные белки с молекулярной массой характерной для белков-поринов. Изолированные белки получали из клеток Р. haloplanktis, разрушая пептидогликановый слой лизопимом и обрабатывая клеточные оболочки неионным детергентом Тритон Х-100 и трипсином, с последующей гельхроматографией на сефакриле. Для изучения порообразующих свойств белков наружной мембраны морских бактерий мы проводили эксперименты по реконструкции фрагментов наружных мембран и изолированных фракций белков, солюбилизированных в ДСН, в бислойные липидные мембраны (БЛМ). Показано, что в составе наружных мембран морских грамотрицательных бактерий рода Pseudoalteromonas присутствуют белки, которые по своей функциональной активности могут быть отнесены к классу поринов. При реконстукции в БЛМ белков, изолированных из наружных мембран и солюбилизированных в ДСН, наблюдалось дискретное увеличение проводимости мембран, характерное для белков поринов наружных мембран наземных микроорганизмов. Величина проводимости регистрируемых пор в моноолеиновых БЛМ в 150 mM NaCI изменялась в пределах от 60-80 пСм до 360-600 пСм и величина наиболее вероятной поры составляла 240-320 пСм. Зависимость проводимости одиночной поры от мембранного потенциала в диапозоне 0-100 мВ была линейной и имела точку перегиба при 60 мВ для моноолеиновых БЛМ. Сравнение распределения проводимости пор суммарной фракции белков и фракции изолированного белка указывает, что, возможно, наружная мембрана морской бактерии Р. haloplanktis содержит несколько порообразующих белков.