ВЛИЯНИЕ СФИНГОЗИНА НА [Ca(2+)]i В КЛЕТКАХ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

Асташкин Е. И., Молотковская И. М., Беспалова Ю. Б., Грачев С. В., Твердислов В. А.
Московская медицинская академия, Москва; Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, Москва; Физический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва
Для выяснения механизма, лежащего в основе сигнализации, вызываемой сфингозином (Sph), было изучено его влияние на внутриклеточную концентрацию свободных ионов Са2+ ([Ca2+]i) в нейтрофилах и перевиваемых HL-60 клетках человека. За изменением [Ca2+]i следили с помощью Фуры 2. В этих клетках Sph индуцировал доза-зависимое увеличение [Ca2+]i. Повышение [Ca2+]i, индуцированное Sph (10-12 мкМ), характеризовалось медленным постоянным ростом и напоминало действие детергента. Sph, при низких концентрациях (< 7 мкМ), вызывал двухфазное увеличение [Ca2+]i, обусловленное быстрым выходом ионов Са2+ из депо и последующим транспортом Са2+ из среды в клетку (Ca2+ influx). В среде без ионов Са2+ Sph (5 мкМ) транзитно повышал [Ca2+]i, который возвращался к исходным значениям через 5-7 мин. Предварительная обработка клеток тапсигаргином (TG, 400 нМ) подавляла Са2+-ответ на Sph. При добавлении TG к HL-60 клеткам или нейтрофилам на фоне действия Sph, увеличение [Ca2+]i, индуцированное TG, резко снижалось. Sph, добавленный к суспензиям клеток в Са2+-среде, после TG, вызывал выраженное снижение [Ca2+]i, которое можно объяснить прямым ингибиторным действием Sph на кальциевые каналы плазматических мембран, управляемые Са2+-депо (SOC-каналы). Таким образом, представленные результаты позволяют предположить, что Sph мобилизует ионы Са2+ из TG-чувствительных кальциевых депо и блокирует SOC-каналы плазматических мембран. Очевидно, что метаболизм Sph играет важную роль в гомеостазе ионов Са2+ в HL-60 клетках и нейтрофилах человека.