ОБРАЗОВАНИЕ КОМПЛЕКСОВ ПОЛИНУКЛЕОТИДОВ С ЛИПОСОМАМИ ИЗ ФОСФАТИДИЛХОЛИНА В ОТСУТСТВИЕ ДВУХВАЛЕНТНЫХ КАТИОНОВ ПО ДАННЫМ МИКРОКАЛОРИМЕТРИИ И ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ

Кувичкин В. В., Емельяненко В. И., Кузнецова С. М., Петров А. И., Жданов Р. И.
Институт биофизики клетки РАН, , 142292 Пущино; *Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, 142292 Пущино; **ИБМХ, 119832 Москва
Известно, что полинуклеотиды образуют комплексы с цвиттерионными липосомами в присутствии катионов Me2+. Ранее было показано образование комплексов между ДНК и фосфолипидами в 70% спиртовом растворе. В настоящей работе методом микрокалориметрии показано образование комплексов: поли(А)*поли(У) и липосом из димиристоилфосфатидилхолина (ДМФХ) и дипальмитоилфосфатидилхолина (ДПФХ), Sigma, гомогенные по данным проведенного нами анализа методом ТСХ. ПолиА и поли(У) фирмы "Reanal" с М.м. около 5х104 Да подвергались очистке от низкомолекулярных примесей на колонке с сефадексом G-25 с последующей лиофилизацией препаратов. Навески лиофилизованных поли А и поли(У) растворяли с исходной концентрацией 4мМ (в пересчете на основание) в буфере, состоящем из 10 мМ HEPES, pH 7,2, 10 мМ NaCl. Липосомы из ДМФХ готовили методом ультразвуковой обработки, а липосомы из ДПФХ - методом этанольной инжекции. Комплексы липосомы- поли(А)*поли(У) выдерживали не менее 30 мин перед опытом. Измерения проводили с помощью микрокалориметра ДАСМ-4. В комплексе поли(А)*поли(У) + липосомы из ДПФХ оба компонента плавятся в районе 40 °С, и только незначительный сдвиг в Тm такого комплекса по сравнению с Tm кривой плавления суммой индивидуальных компонент, взятых в том же соотношении, указывает на существование взаимодействия между компонентами комплекса и в отсутствие ионов Mg2+. Об этом же свидетельствуют данные электронной микроскопии комплексов поли(А)*поли(У) - липосомы из ДПФХ, где видно образование стопок липосом и других агрегатов. В комплексах поли(А)*поли(У)-липосомы из ДМФХ, у которого Tm= 21,4°С наблюдаемое изменение формы кривой плавления наряду с незначительным сдвигом Tm в сторону увеличения подтверждает наличие взаимодействия между липосомами и поли(А)*поли(У) в отсутствие ионов Mg2+. Обсуждается роль фосфолипид-нуклеиновых взаимодействий в функционировании клетки.