ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТОДОМ КОНФОКАЛЬНОЙ МИКРОСПЕКТРОСКОПИИ НАКОПЛЕНИЯ И ЛОКАЛИЗАЦИИ В КЛЕТКАХ ТЕРАФТАЛА, КАТАЛИТИЧЕСКОГО КОМПОНЕНТА НОВОГО КЛАССА ЦИТОСТАТИКОВ - БИНАРНЫХ СИСТЕМ

Феофанов А. В., Гришин А. И., Шитова Л. А., Кармакова Т. А., Якубовская Р. И., Эгрет-Шарлье М., Вини П.
Институт биоорганической химии им. М. М.Шемякина и Ю. А.Овчинникова РАН, 117871 Москва; *Московский НИИ им. П. А. Герцена, 125284 Москва; **Centre de Biophysique Moleculaire, C.N.R.S., 45071 Orleans, France
Терафтал (Тф) - октакарбоксифталоцианин кобальта, является представителем нового класса цитостатиков. Он катализирует интенсивное образование свободных радикалов в присутствии аскорбиновой кислоты. Тф поглощает свет в красной области спектра (lмакс= 675 нм, e= 105 л/(моль·cм)), но не флуоресцирует. Поэтому изучение его локализации в клетках обычными методами микроскопии невозможно. Для того, чтобы исследовать распределение данного соединения в клетках, нами использован метод конфокальной микроспектроскопии и реконструкции спектральных изображений (КОМИРСИ). Метод КОМИРСИ основан на измерении двумерного набора внутриклеточных спектров противоопухолевых агентов с трехмерным пространственным разрешением. В случае Тф измерялись спектры резонансного комбинационного рассеяния (РКР). Анализ этих спектров позволяет обнаружить присутствие Тф в клетках, охарактеризовать его состояние (мономерная форма или агрегаты) в каждой точке клетки и реконструировать карты количественного внутриклеточного распределения агента. Исследования проводили на живых клетках аденокарциномы легкого человека А549. Уже через 10 мин инкубации клеток с Тф в концентрации 400 мкмоль/л агент распределен квазиоднородно по всей цитоплазме (концентрация 30-80 мкмоль/л) и преимущественно накапливается в ядрах, где его средняя концентрация - 130-180 мкмоль/л, а пиковые концентрации достигают 250-300 мкмоль/л. При увеличении времени инкубации клеток с Тф до нескольких часов помимо равномерно распределенного Тф в цитоплазме появляется значительное количество мелких включений размером от 1 до 4 мкм. По-видимому, это лизосомы, в которых концентрация Тф через 1-2,5 ч достигает 300-600 мкмоль/л, а через 14 ч - 1500-3000 мкмоль/л. При этом в окружающей включения цитоплазме концентрация Тф (14 ч инкубации) составляет 150-200 мкмоль/л, а в ядре- 300-400 мкмоль/л.