ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТОДОМ КОНФОКАЛЬНОЙ МИКРОСПЕКТРОСКОПИИ НАКОПЛЕНИЯ И ЛОКАЛИЗАЦИИ В КЛЕТКАХ ТЕРАФТАЛА, КАТАЛИТИЧЕСКОГО КОМПОНЕНТА НОВОГО КЛАССА ЦИТОСТАТИКОВ - БИНАРНЫХ СИСТЕМ
Феофанов А. В., Гришин А. И., Шитова Л. А., Кармакова Т. А., Якубовская Р. И., Эгрет-Шарлье М., Вини П.
Институт биоорганической химии им. М. М.Шемякина и Ю. А.Овчинникова РАН, 117871 Москва; *Московский НИИ им. П. А. Герцена, 125284 Москва; **Centre de Biophysique Moleculaire, C.N.R.S., 45071 Orleans, France
Терафтал (Тф) - октакарбоксифталоцианин
кобальта, является представителем нового класса цитостатиков.
Он катализирует интенсивное образование свободных радикалов в
присутствии аскорбиновой кислоты. Тф поглощает свет в красной
области спектра (lмакс= 675 нм, e= 105 л/(моль·cм)),
но не флуоресцирует. Поэтому изучение его локализации в клетках
обычными методами микроскопии невозможно. Для того, чтобы исследовать
распределение данного соединения в клетках, нами использован метод
конфокальной микроспектроскопии и реконструкции спектральных изображений
(КОМИРСИ). Метод КОМИРСИ основан на измерении двумерного набора
внутриклеточных спектров противоопухолевых агентов с трехмерным
пространственным разрешением. В случае Тф измерялись спектры резонансного
комбинационного рассеяния (РКР). Анализ этих спектров позволяет
обнаружить присутствие Тф в клетках, охарактеризовать его состояние
(мономерная форма или агрегаты) в каждой точке клетки и реконструировать
карты количественного внутриклеточного распределения агента. Исследования
проводили на живых клетках аденокарциномы легкого человека А549.
Уже через 10 мин инкубации клеток с Тф в концентрации 400 мкмоль/л
агент распределен квазиоднородно по всей цитоплазме (концентрация
30-80 мкмоль/л) и преимущественно накапливается в ядрах, где его
средняя концентрация - 130-180 мкмоль/л, а пиковые концентрации
достигают 250-300 мкмоль/л. При увеличении времени инкубации клеток
с Тф до нескольких часов помимо равномерно распределенного Тф
в цитоплазме появляется значительное количество мелких включений
размером от 1 до 4 мкм. По-видимому, это лизосомы, в которых концентрация
Тф через 1-2,5 ч достигает 300-600 мкмоль/л, а через 14 ч -
1500-3000 мкмоль/л. При этом в окружающей включения цитоплазме
концентрация Тф (14 ч инкубации) составляет 150-200 мкмоль/л,
а в ядре- 300-400 мкмоль/л.