РАЗРЕШЕННАЯ ВО ВРЕМЕНИ СПЕКТРОСКОПИЯ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ ЗОНДОВ: ИЗУЧЕНИЕ СТРУКТУРЫ БЕЛКОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
Сырейщикова Т. И., Якименко М. Н., Добрецов Г. Е., Грызунов Ю. А.
Физический институт им. П.Н. Лебедева РАН, Москва; *НИИ физико-химической медицины Минздрава РФ, Москва; **Daresbury Laboratory, Warrington, UK
В пучке синхротронного
излучения Лаборатории Дарсбери было проведено изучение трех типов
липопротеинов, выделенных из крови здоровых доноров, искусственных
мембран (липосом) и липопротеинов (липидных сфер), а также сывороточного
альбумина человека. Использовались флуоресцентные липидные зонды
К-37 и К-35, созданные в России. Зонд К-37 является специфическим
к липопротеинам, зонд К-35- к альбумину. Три вида параметров использовались
для описания динамики липидных систем: 1) времена затухания флуоресценции
зондов, 2) числа молекул зонда, испускающих флуоресценцию с различными
временами затухания и 3) разрешенная во времени деполяризация
флуоресценции. Для зонда К-37 было получено, что каждый из измеренных
параметров отражает монотонные изменения динамических свойств
в ряду: липидные сферы, липопротеины очень низкой плотности, липопротеины
низкой плотности, липопротеины высокой плотности, липосомы. Этот
ряд характеризуется увеличением отношения полярных/ неполярных
липидов. Был сделан вывод, что разрешенная во времени спектроскопия
флуоресцентного зонда К-37 может быть использована для детектирования
некоторых структурных модификаций в липопротеинах, связанных с
их атерогенностью. С помощью зонда К-35 изучали конформационные
переходы в сывороточном альбумине человека, индуцированные изменением
pH от 4 до 9. Показано, что интенсивность и средний квантовый
выход флуоресценции зонда возрастают в диапазоне pH от 7 до 9
за счет увеличения числа флуоресцирующих молекул зонда. Изучение
конформационных изменений в сывороточном альбумине человека, индуцированных
изменением pH, дает информацию, полезную для понимания молекулярного
механизма нарушения функций альбумина при различных заболеваниях