АКТИВАЦИЯ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ СЫВОРОТКИ КРОВИ РАЗЛИЧНЫМИ ЛЮМИНОФОРАМИ
Ярош О. Г.
Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им.К.И.Скрябина, кафедра биофизики, 109472 Москва
Сыворотка крови является
основным субстратом исследования для диагностики в медицине и
ветеринарии. Регистрировали спонтанную хемилюминесценцию сыворотки
крови и активированную различными флуоресцентными красителями
с целью повышения чувствительности метода, за счет увеличения
квантового выхода излучения. В качестве активаторов были использованы:
ализариновый красный, конго красный, фуксин кислый, родамин Ж,
метиленовый голубой, акридиновый оранжевый (АО). Во всех приведенных
выше случаях данные флуорохромы не оказывали активирующего действия
на интенсивность хемилюминесценции сыворотки крови, а при высоких
концентрациях являлись тушителями биохемилюминесценции в исследуемом
спектральном диапазоне. Это можно объяснить тем, что данные флуорохромы
ослабляют излучение первичных возбужденных продуктов, перехватывая
энергию их электронного возбуждения, а максимум их собственной
флуоресценции лежит вне области чувствительности ФЭУ-140.С другой
стороны, возможно, что они выступают как классические тушители
спонтанного свечения. Введение родамина Ж в качестве акцептора
энергии было более оправданным, так как он является липидным зондом.
Увеличение сигнала было в 3,2 раза по сравнению со спонтанным
свечением. Наибольшее усиление давал акридиновый оранжевый. Максимум
интенсивности наступал через 5-7 мин после введения активатора
в сыворотку крови и превышал спонтанное свечение в 18,6 раза.
С увеличением концентрации АО происходило и линейное увеличение
интенсивности свечения. В
результате проведенных экспериментов установили,
что линейная зависимость
максимальных значений спонтанной БХЛ сыворотки крови от концентрации
АО сохраняется в диапазоне температур от 35-500С. Этот
эффект подтверждает возможность использования максимальной амплитуды
как одного из критериев степени усиления спонтанного свечения
активаторами.