РОЛЬ ФОСФОЛИПАЗЫ А 2 И ПРОДУКТОВ МЕТАБОЛИЗМА АРАХИДОНОВОЙ КИСЛОТЫ В АКТИВАЦИИ И ИНАКТИВАЦИИ РЕСПИРАТОРНОГО ВЗРЫВА НЕЙТРОФИЛОВ

Аловская А. А., Габдулхакова А. Г., Сафронова В. Г.
Институт биофизики клетки РАН, 142292 Пущино
Ранее мы показали, что при активации нейтрофилов кальциевым ионофором А23187 в разных концентрациях и ФМА зависимость продукции активных форм кислорода (АФК) от концентрации А23187 имела колоколообразную форму: при концентрации А23187 0.1-2 mМ - нарастание, при высоких концентрациях А23187 (2-10 mМ) - спад. На кривой зависимости продукции АФК от концентрации А23187 можно выделить области концентраций ионофора, соответствующие определенному функциональному статусу клетки (праймирования, активации, гиперактивации). На каждой из стадий возможно включение альтернативных механизмов активации респираторного взрыва (РВ) нейтрофилов А23187 и ФМА. Известно, что активация РВ нейтрофилов А23187 и ФМА происходит с участием фосфолипазы А2 (ФЛА2) и продуктов ее метаболизма. В данной работе мы исследовали вклад ФЛА2 и продуктов окисления арахидоновой кислоты (АК) в активацию РВ нейтрофилов в зависимости от функционального состояния клеток. Продукцию АФК оценивали по люминол-зависимой хемилюминесценции (ХЛ). Клетки инкубировали при 37оС с А23187 (0.1-20 mМ) без или на фоне блокаторов: ФЛА2 4-бромофенацил бромида (БФБ); циклооксигеназы - индометацина, липоксигеназы - нордигидрогуаретиковой кислоты, хинакрина, кверцетина, эпоксигеназы (цитохрома Р-450) - проадифена, и фосфолипазы С - неомицина. Затем добавляли ФМА в концентрации 1 mМ и регистрировали ХЛ. На фоне БФБ наблюдали ингибирование продукции АФК в среднем на 50% и эффект слабо зависел от концентрации А23187. Исследование гипоксигеназного пути окисления АК затруднено тем, что примененные блокаторы: хинакрин, кверцетин и нордигидрогуаретиковая кислота, используемые для исследования респираторного взрыва, по нашим результатам гасят ХЛ клеток, являясь "ловушками" АФК. На фоне индометацина и неомицина продукция АФК достоверно не отличалась от контроля во всем диапазоне концентраций А23187. На фоне проадифена в области концентраций А23187 0.1-5 mM не зарегистрировано изменение продукции АФК по сравнению с контролем. В области высоких концентраций А23187 (5-10 mМ) на фоне проадифена наблюдалось усиление продукции АФК, которое зависело от концентрации ионофора. Максимальное усиление составило 187±83% при 8 mМ А23187. Таким образом, при последовательной активации А23187 и ФМА значительную роль в развитии РВ нейтрофилов играет ФЛА2, в области высоких концентраций А23187 активируется эпоксигеназный путь окисления АК, что приводит к снижению ответа клетки на ФМА.