Артюх Р. И., Качалова Г. С., Ланина Н. Ф., Никольский Д. О., Тимофеев В. П.
Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, 142292 Пущино; *Институт молекулярной биологии им.В.А.Энгельгардта РАН, 117984 Москва
Методом спин-метки исследованы
кристаллы тетрагональной формы спин-меченого лизоцима. Модификация
белка проводилась по единственному в структуре белка гистидиновому
остатку His-15 спин-метками на основе нитроксила - имидазолидина.
Показано, что спин-метка связывается с молекулами белка в кристалле
с коэффициентом посадки 0,1. Анализ зависимости формы спектра
ЭПР, его интенсивности и величины расстояния между крайне широкими
пиками от ориентации кристалла относительно прикладываемого магнитного
поля с учетом элементов симметрии кристалла позволил однозначно
определить ориентацию Z-оси нитроксила на His-15 как параллельную
кристаллографической оси а
в независимой части элементарной
ячейки. В кристалле с пространственной
группой P4
32
12 всегда
присутствуют две взаимноперпендикулярные ориентации Z-осей нитроксила
вдоль кристаллографических осей a и
b. Существенное отличие максимального расстояния между пиками
в уширенных триплетных спектрах ЭПР от Z-величины главного значения
тензора СТС доказывает, что частичное усреднение обоих тензоров
связано с быстрыми ограниченными по углам переориентациями нитроксила
на конце остатка His-15, экспонированного в большой межмолекулярный
канал. При помощи теоретического моделирования спектров по оригинальной
программе для персонального компьютера получена количественная
информация о наблюдаемых изменениях в спектрах ЭПР. Нитроксильный
радикал на конце гистидинового остатка лизоцима в кристалле не
является неподвижной структурой, а совершает быструю хаотическую
угловую переориентацию в ограниченных пределах, в результате чего
происходит частичное усреднение магнитных тензоров. Поэтому предлагается
вводить в теоретические расчеты вместо неизвестного хаотического
процесса переориентации нитроксила адекватный ему модельный процесс
колебаний нитроксила в ограниченных пределах углов от -a
до +a вокруг некоторой оси
, положение
которой определяется углами
или двумя
другими параметрами, соответствующими углам
:
параметром упорядоченности
и вспомогательным
параметром
.Такой модельный процесс приводит
к следующим формулам для частично усредненных главных компонент
обоих магнитных тензоров нитроксила
и
по отношению к исходным
:
,
где:
;
; ; ;
; ;
при i=x,y,z, переставляемых
циклически,
;
; ;
(Все выражения для -тензора
одинаково справедливы для компонент тензора
). Теоретическое
моделирование спектров ЭПР кристалла позволило установить, что
Z-оси нитроксилов на молекулах лизоцима не являются копланарными,
и определить параметры ориентации нитроксилов в кристаллах спин-меченого
белка, а также сделать принципиально важный вывод о том, что заметная
уширенность спектров ЭПР кристаллов белка по сравнению с узкими
спектрами, которые дает радикал в монокристалле, прямо доказывает
наличие ранее предсказанного нами распределения нитроксилов по
кластерам, каждый из которых соответствует вполне определенному
типу быстрых пространственных угловых переориентаций нитроксила.