ИССЛЕДОВАНИЕ СТРОЕНИЯ ЛИПОПРОТЕИНОВ ОЧЕНЬ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ ПЛАЗМЫ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

Исакова С. И., Гуларян С. К., Добрецов Г. Е., Гусев С. А.
НИИ физико-химической медицины, 119828 Москва
Липопротеины плазмы крови играют важную роль в обмене липидов в организме человека. Нарушение количества и структуры липопротеинов в крови является основным фактором развития атеросклероза. В настоящее время всё больший интерес вызывает вопрос о связи структуры липопротеинов их функции и роли модифицированных липопротеинов в развитии заболеваний сердечно-сосудистой системы. Липопротеины плазмы крови разделяют на три основных класса: липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП), липопротеины низкой плотности (ЛПНП) и липопротеины высокой плотности (ЛПВП). По одной из гипотез, основанной на функциональных характеристиках липопротеинов, ЛПОНП является предшественником липопротеинов других классов. Согласно существующим на сегодняшний день представлениям считается, что ЛПОНП  - это сферические частицы с диаметром около 40 нм. В настоящей работе приводятся результаты, которые позволяют предположить, что частицы ЛПОНП имеют другую структуру. Для оценки размеров частиц ЛПОНП была измерена величина площади поверхности частиц. При определении площади поверхности ЛПОНП использовали метод безызлучательного переноса энергии между флуоресцентными зондами. Оба зонда 4-[5(фенилоксазолил-2)-1-пентадецил]пиридиний n-толуолсульфонат (К-68) и 4-(n-диметиламиностирил)-1-додецилпиридиний n-толуолсульфонат (ДСП-12) имеют положительный заряд и локализуются на границе раздела липид - вода. Это делает удобным их использование для исследования поверхности липидных частиц. Эффективность переноса энергии К-68 - ДСП-12 измеряли в 15 различных суспензиях ЛПОНП, выделенных из крови здоровых доноров. На основании полученных данных, согласно теории, была рассчитана величина средней площади поверхности, которая равна 259 м2 на 1 г веса ЛПОНП. Данные о количестве и удельном объеме молекул неполярных липидов (триглицериды и эфиры холестерина), образующих ядро ЛПОНП, позволяют рассчитать объем гидрофобной части частиц. Сопоставляя результаты по площади поверхности с объемом частиц, можно рассчитать допустимые размеры частиц. Если частица ЛПОНП имеет сферическую форму, то её диаметр не может быть больше 25 нм. Согласно этим данным частица ЛПОНП может также иметь форму эллипсоида, тогда её размеры могут быть r = 8,3 ± 1,7 нм и R = 22 ± 13 нм. Для оценки размеров ЛПОНП другим независимым способом использовали метод фильтрации. Фильтрацию производили через ядерные фильтры из лавсана толщиной 12 мкм и диаметром пор от 30 до 100 нм. Фильтры были изготовлены в лаборатории ядерных исследований ОИЯИ г.Дубна. Размер и форму пор определяли методом сканирующей электронной микроскопии. Для оценки размеров ЛПОНП в качестве стандарта использовали латексные частицы диаметром 20, 40 и 50 нм (Duke Scientific Corp., США). Было показано, что кривая эффективности прохождения частиц ЛПОНП через фильтры с различным диаметром пор близка к кривой фильтруемости латексных частиц диаметром 20м. Таким образом, результаты, полученные двумя независимыми методами, позволяют предположить, что частицы ЛПОНП представляют собой сферические частицы с диаметром, близким к 20 нм, либо имеют несферическую форму.