СПЕКТРАЛЬНЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ (СИНТЕТИЧЕСКОЙ) АКТИВНОСТИ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИЯХ

Карнаухова Н. А.
Институт биофизики клетки РАН, 142292 Пущино
Для исследования функционального состояния иммунокомпетентных клеток был разработан метод, основанный на окраске мазков крови флуоресцентным красителем акридиновым оранжевым (АО). Было показано, что спектры флуоресценции окрашенных по определенной методике АО лимфоцитов содержат полосы излучения в зеленой (530 нм) и красной (640 нм) областях спектра, соотношение интенсивностей которых зависит от функционального состояния клеток. Это соотношение интенсивностей полос излучения в виде безразмерного параметра a=I640/I530= k·(HK1/HK2)=K·(РНК/ДНК) (1) было предложено использовать в качестве критерия, характеризующего синтетическую (функциональную) активность клеток. Наиболее четко взаимосвязь величины параметра б с синтетической активностью клеток была показана на примере изменения параметра б лимфоцитов и титра антител, синтезируемых в крови в процессе иммунизации животных чужеродным белком. Более того, результаты этой работы указывали на то, что интенсивность излучения в красной области спектра (640 нм) пропорциональна не общему количеству РНК в клетке, а только количеству функционально активной РНК. Этот вывод получил дальнейшее развитие в работах, на основе которых приведенное выше уравнение (1) должно быть уточнено: a=I640/I530= k1·HK1/k2·HK2= K·(АРНК/ДНК) (2), где АРНК - активная компонента РНК одиночной клетки, k1, k2, К - коэффициенты связывания АО с НК. Именно это обстоятельство и лежит в основе высокой чувствительности данного метода определения синтетической активности одиночных клеток. Окрашенные мазки крови исследовали методом микроспектрального флуоресцентного анализа с использованием двухволнового микрофлуориметра "Радикал ДМФ-2" ("Радикал", Россия). В работе обсуждаются возможности флуоресцентной диагностики иммунокомпетентных клеток при онкологических и инфекционных заболеваниях, а также при действии на организм различных физических факторов (ионизирующие излучения, низкоинтенсивные ЭМП и др.).