ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ АРАХИДОНОВОЙ КИСЛОТЫ С НМДА-КАНАЛАМИ ПИРАМИДНЫХ НЕЙРОНОВ ГИППОКАМПА КРЫСЫ
Елшанская М. В., Соболевский А. И., Ходоров Б. И.
Институт общей патологии и патофизиологии РАМН, 125315 Москва
Взаимодействие арахидоновой
кислоты (АК) с НМДА-каналами пирамидных нейронов гиппокампа крысы
было исследовано методом пэтч-кламп в конфигурации "целая
клетка". Токи через НМДА-каналы вызывали аппликацией 100
мкМ аспартата (АСП) в безмагниевой среде, содержащей 3 мкМ глицин.
При одновременном применении АСП и АК (10 мкМ) возникал ток, пиковая
величина которого практически не отличалась, а стационарная в
1,2+2 раза превышала стационарную величину контрольного тока.
После 10-60 с предаппликации АК (10 мкМ) ток в ответ на применение
АСП превышал контрольный. Однако в этом случае пиковая величина
тока увеличивалась в 1,5+2 раза сильнее, чем стационарная. Кинетика
потенциации пиковой величины тока существенно отличалась от кинетики
потенциации его стационарной величины. Кинетика потенциации стационарной
величины определялась взаимодействием АК с открытыми НМДА-каналами.
Константы связывания и диссоциации для открытых каналов, определенные
в экспериментах, в которых АК применялась в непрерывном присутствии
АСП в растворе, оказались k1
= 20,0±2,7
с-1 мМ-1 и k2=0,089±0,003
с-1 соответственно. Кинетика потенциации пиковой величины
тока определялась взаимодействием АК с закрытыми НМДА-каналами
и оказалась существенно медленнее, чем для стационарной. Так,
константы связывания и диссоциации АК для закрытых каналов были
оценены с помощью математического моделирования как
k3=0,004
с-1 мкМ-1 и k4=0,03
с-1 соответственно. Потенциация токов, вызванная АК,
не зависела от мембранного потенциала в диапазоне от -100 до 40
мВ и присутствия восстанавливающего SH-агента дитиотрейтола
(DTT). Добавление
на 15 мин во внеклеточную среду ингибитора циклооксигеназы индометацина
(5 мкМ) не изменяло действия АК, что свидетельствовало о том,
что действие АК не связано с продуктами ее циклооксигеназного
расщепления. Эксперименты по применению АК совместно с тетрапентиламмонием
(0,5 мМ) позволили предположить, что 10 мкМ АК повышает вероятность
открывания НМДА-каналов в 2,3±0,5 раза и увеличивает их десенситизацию
в 1,4±0,1 раза, что хорошо согласуется с данными предыдущих исследований
(Miller et al.,
1992, Casado and Ascher,
1998). Работа поддержана РФФИ.