ФОТОАФФИННАЯ МОДИФИКАЦИЯ ТЕТРАЦИКЛИНОВОГО РЕПРЕССОРА TETR D ТЕТРАЦИКЛИНОМ
Копылов А. М., Белякова М. М., Анохина М. М., Доброе Е. Н., Спиридонова В. А., Мусолямов А. X., Егоров Ц. А., Виттман-Либольд Б., Сэнгер В.
Химический факультет и *HИИ Физико-химической биологии им. А.Н.Белозерского; **Московский государственный университет им. М.В.Ломоносова, 119899 Москва. Россия; ***Институт молекулярной биологии РАН, Москва, Россия; ***Центр молекулярной медицины mi. Макс
Несмотря на то, что тетрациклин
(Те) уже давно широко используется в медицине и ветеринарии, детальный
молекулярный механизм его действия остается мало изученным, и
это сильно затрудняет рациональный дизайн новых антибиотиков тетрациклиновой
группы. Для понимания механизмов действия Те необходимо знание
структуры комплексов Те с его молекулами-мишенями на молекулярном
уровне. Современными методами для получения подобной информации
являются метод рентгеноструктурного анализа (РСА) и ядерного магнитного
резонанса, которые имеют свои ограничения. Комплементарным подходом,
который может позволить получить информацию об активном центре
мишени для связывания Те, является фотоиндуцируемая химическая
модификация, т.н. сшивка нулевой длины. В молекуле Те имеется
сопряженная система связей, поглощающая в области 365 нм, где
не поглощают молекулы белков-мишеней. В работе проведено сшивание
7-[3H]-Tc
с белком TetRD
под действием излучения дуговой ртутной лампы мощностью 250 Вт
с длиной волны 366 нм. После облучения комплекс Тс с белком подвергали
гидролизу протеиназой V8.
Полученные пептиды разделяли, радиоактивные пептиды секвенировали.
Те сшивается с одним (или обоими) пептидами 159 - Е84 и А173-Е183
белка TetRD
Оба пептида содержат в своем составе аминокислотные остатки, сближенные
с Тс по данным РСА. В работе показана принципиальная возможность
использования метода фотоиндуцируемой химической сшивки для изучения
молекулярной структуры мишеней действия антибиотика тетрациклина.
Работа поддержана грантами РФФИ 78-04-49005 и Университеты России
5099.