О ВОЗМОЖНОМ МЕХАНИЗМЕ ВЛИЯНИЯ БИСУЛЬФИТ ИОНА НА ПИРИДОКСАЛЬЗАВИСИМЫЕ ТРАНСАМИНАЗЫ

Якунин Д. Ю., Мартынов М. Н., Титова Н. М.
Красноярский государственный университет, Биологический факультет, 660041 Красноярск
В предыдущих исследованиях нами было показано, что бисульфит ион ингибирует активность аланин- и аспартаттрансаминаз. При добавлении 2-меркаптоэтанола происходила реактивация ферментов. Данный эффект не описан в литературе. На основании проведенных экспериментов было сделано предположение, что механизм действия бисульфит иона связан с модификацией кофермента- пиридоксаль-5-фосфата (ПЛФ). Для подтверждения этой гипотезы нами были проведены исследования по изучению взаимодействия ПЛФ и бисульфит иона в присутствии и отсутствии 2-меркаптоэтанола. В работе использовался очищенный препарат ПЛФ. Были записаны спектры поглощения в видимой и ультрафиолетовой области раствора ПЛФ, смесей ПЛФ с бисульфитом натрия, ПЛФ с 2-меркаптоэтанолом и ПЛФ с бисульфитом натрия и 2-меркаптоэтанолом. Запись спектров осуществляли на регистрирующем спектрофотометре Katron с компьютерной обработкой данных. Спектр поглощения ПЛФ имеет максимумы поглощения 318 и 390 нм, что соответствует данным литературных источников. Максимум спектра поглощения смеси ПЛФ с бисульфитом натрия- 278 нм, а минимум располагается на 387 нм, то есть в области максимума поглощения ПЛФ. Спектр поглощения смеси ПЛФ с бисульфитом натрия и 2-меркаптоэтанолом имеет три максимума поглощения 279, 269 и 385 нм. Спектр поглощения смеси ПЛФ с 2-меркаптоэтанолом практически соответствует спектру поглощения ПЛФ. Полученные нами результаты могут свидетельствовать о том, что бисульфит ион взаимодействует с ПЛФ об этом говорит изменение формы спектра и снижение поглощения в области 380-395 нм, а также сдвиг максимума поглощения в область 278 нм. В присутствии 2-меркаптоэтанола один из максимумов поглощения находится на 387 нм, что, видимо, связано с высвобождением свободного ПЛФ. Судя по полученному спектру, 2-меркаптоэтанол с ПЛФ не взаимодействует. Предполагаемый механизм реакции состоит во взаимодействии альдегидной группы ПЛФ с бисульфит ионом с образованием бисульфитного производного ПЛФ. Сопоставление спектров поглощения смесей ПЛФ с бисульфитом натрия и ПЛФ с бисульфитом натрия и 2-меркаптоэтанолом доказывает, что 2-меркаптоэтанол способствует высвобождению свободного кофермента из его бисульфитного производного. Механизм этой реакции пока не исследован и требует дальнейшего изучения. Данные, полученные нами в модельном эксперименте с ПЛФ, согласуются с результатами исследования влияния бисульфит иона на трансаминазы, что доказывает общность механизма ингибирующего действия бисульфит иона, а также показывает, что бисульфит ион действует не на белковую глобулу, а на кофермент в активном центре трансаминаз.