ХОЛОДОВОЙ И ОСМОТИЧЕСКИЙ ШОК ИЗОЛИРОВАННЫХ ГЕПАТОЦИТОВ КРЫС
Коптелов В. А., Кудокоцева Е. В., Пакулова O. K., Лежанин С. Н., Олейник О. А., Середа Т. П.
Институт проблем криобиологии и криомедицины, 310015 Харьков, Украина
Холодовой и осмотический
шок являются двумя сторонами одного общего процесса, представляющего
основу повреждения клеток, тканей и органов при охлаждении и замораживании.
Разработка новых подходов, направленных на увеличение устойчивости
биологических объектов к охлаждению и замораживанию, диктует необходимость
выявления клеточного компартмента, наиболее чувствительного к
холодовому воздействию. Целью настоящей работы явилось изучение
особенностей развития холодового температурного шока изолированных
гепатоцитов крыс при действии на них гипертонических растворов
NaCl и сахарозы
в температурном интервалах 0 - 37 °С
и 37 - 0 °С.
Гепатоциты выделяли оригинальным ферментативным методом, используя
трипсин в качестве деструктирующего агента. Экспресс-оценка выделенных
гепатоцитов проводилась с помощью окрашивания их суправитальным
красителем трипановым синим (конечная концентрация 0,1%). Жизнеспособность
суспензии свежевыделенных гепатоцитов составляла 85 - 95%.
Высвобождение ионов калия в надосадочную жидкость, выход ферментов
(АсАТ, АлАТ) в экстрацеллюлярную среду, а также накопление флуоресцеина
в супернатанте изолированных гепатоцитов, предварительно нагруженных
флуоресцеиндиацетатом, использовали в качестве маркеров клеточного
повреждения. Было установлено, что динамика изменения концентрации
вышеизложенных маркеров в условиях холодового и осмотического
шока носит нелинейный характер. Обсуждаются возможные механизмы
реализации и регуляции повреждающего действия холодового и осмотического
(NaCl,
сахароза) шока на изолированные гепатоциты крыс.