ХОЛОДОВОЙ И ОСМОТИЧЕСКИЙ ШОК ИЗОЛИРОВАННЫХ ГЕПАТОЦИТОВ КРЫС

Коптелов В. А., Кудокоцева Е. В., Пакулова O. K., Лежанин С. Н., Олейник О. А., Середа Т. П.
Институт проблем криобиологии и криомедицины, 310015 Харьков, Украина
Холодовой и осмотический шок являются двумя сторонами одного общего процесса, представляющего основу повреждения клеток, тканей и органов при охлаждении и замораживании. Разработка новых подходов, направленных на увеличение устойчивости биологических объектов к охлаждению и замораживанию, диктует необходимость выявления клеточного компартмента, наиболее чувствительного к холодовому воздействию. Целью настоящей работы явилось изучение особенностей развития холодового температурного шока изолированных гепатоцитов крыс при действии на них гипертонических растворов NaCl и сахарозы в температурном интервалах 0 - 37 °С и 37 - 0 °С. Гепатоциты выделяли оригинальным ферментативным методом, используя трипсин в качестве деструктирующего агента. Экспресс-оценка выделенных гепатоцитов проводилась с помощью окрашивания их суправитальным красителем трипановым синим (конечная концентрация 0,1%). Жизнеспособность суспензии свежевыделенных гепатоцитов составляла 85 - 95%. Высвобождение ионов калия в надосадочную жидкость, выход ферментов (АсАТ, АлАТ) в экстрацеллюлярную среду, а также накопление флуоресцеина в супернатанте изолированных гепатоцитов, предварительно нагруженных флуоресцеиндиацетатом, использовали в качестве маркеров клеточного повреждения. Было установлено, что динамика изменения концентрации вышеизложенных маркеров в условиях холодового и осмотического шока носит нелинейный характер. Обсуждаются возможные механизмы реализации и регуляции повреждающего действия холодового и осмотического (NaCl, сахароза) шока на изолированные гепатоциты крыс.