ВКЛАД АДГЕЗИИ НА СТЕКЛО В ЛЮМИНОЛЗАВИСИМУЮ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИЮ ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ, СТИМУЛИРОВАННУЮ ДОБАВЛЕНИЕМ СУЛЬФАТА БАРИЯ
Пирязев А. П., Владимиров Ю. А., Шерстнев М. П.
Научно-исследовательский институт физико-химической медицины МЗ РФ, 119828 Москва
При добавлении сульфата
бария (СБ) к цельной крови человека или животных в присутствии
люминола возникает вспышка хемилюминесценции (ХЛ). Способные к
фагоцитозу клетки крови поглощают кристаллы сульфата бария и оседают
на дно кюветы, что сопровождается развитием вспышки люминолзависимой
ХЛ. При проведении световой микроскопии было установлено, что
кристаллы СБ адгезируют на поверхности лейкоцитов и вместе с ними
оседают на дно кюветы. Размеры кристаллов примерно в 10 раз меньше
размеров лейкоцитов. При электронно-микроскопическом исследовании
были обнаружены агрегаты кристаллов СБ неправильной формы в виде
болюсов с размерами от 50 нм до 1,5 мкм. С размерами менее
50 нм и более 1,5 мкм агрегаты не встречались. Отношение длины
болюса к его поперечному размеру для небольших агрегатов величиной
до 750 нм составляло 1, а для крупных кристаллов величиной до
1,5 мкм -доходило до 5. При подсчете размеров агрегатов кристаллов
по данным двух электронограмм 60% агрегатов кристаллов были представлены
с размерами от 50 до 200 нм. Агрегаты с размерами от 50 до 350
нм составляли 76% всех кристаллов. Таким образом, основная масса
кристаллов представлена довольно однородной популяцией с размерами
от 50 до 200 нм. Как показали электронно-микроскопические исследования,
кристаллы СБ поглощаются клетками с развитием дегрануляции в течение
10 мин и более. При взаимодействии кристаллов СБ с клетками вначале
происходит их адгезия к лейкоцитам и последующее поглощение лейкоцитами
отдельных кристаллов и агрегатов кристаллов. Следовательно, развитие
ХЛ связано, по-видимому, с фагоцитозом кристаллов СБ. Однако неизвестно,
возникает ли ХЛ только при фагоцитозе кристаллов или осевшие на
дно кюветы клетки способны адгезировать на поверхность стекла,
внося дополнительный вклад в регистрируемое свечение. Для выяснения
этого вопроса было проведено измерение ХЛ в обычных кварцевых
кюветах (п=5) и в кюветах, обработанных силиконом, для
предотвращения адгезии фагоцитов на стекло (п=5). Оказалось,
что в обычных кюветах амплитуда вспышки ХЛ цельной крови человека
составила (3,66+0,09)·106 квант/с·4р
и кроликов -
(2,12+0,12)·106 квант/с·4 р.
В силиконированных
кюветах значения амплитуды вспышки ХЛ составили (3,65+0,09)·106
и (1,43+0,17)·106 квант/с·4р
соответственно.
Видно, что после обработки кюветы силиконом, амплитуда вспышки
ХЛ крови человека практически не изменилась, а у кролика снизилась
в среднем на 33 %. Таким образом, механизм возникновения стимулированной
сульфатом бария люминолзависнмой ХЛ цельной крови человека и кролика
имеет отличия. Так, ХЛ цельной крови человека полностью определяется
поглощением фагоцитами кристаллов сульфата бария. В то время как
в ХЛ цельной крови кролика некоторый вклад вносит адгезия клеток
на стекло.