ЗАВИСИМОСТЬ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТРАНСФЕКЦИИ КЛЕТОК В КУЛЬТУРЕ ОТ ЗАРЯДА МОДУЛЬНЫХ КОНСТРУКЦИЙ ДЛЯ ПЕРЕНОСА ГЕНОВ ПРИ ПОМОЩИ РЕЦЕПТОР-ОПОСРЕДОВАННОГО ЭНДОЦИТОЗА

Розенкранц А. А., Смирнова О. А., Иванов Н. Е., Соболев А. С.
Биологический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, 119899 Москва; * Биофизическая лаборатория, ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологии РАСХН, 127550 Москва
Ранее нами была noкaзaнa (Sobolev et al., 1998) возможность использования эндоцитируемой ДНК-переносящей конструкции с инсулином в качестве эндоцитируемого лиганда для переноса генов in vitro и in vivo. В продолжение этой работы мы представляем результаты исследования влияния состава модульной ДНК-переносящей конструкции на эффективность трансфекции. На двух линиях клеток (гепатома человека PLC/PRF/5 и эпителий молочной железы мыши НС-11) по измерению активности переносимого гена светлячковой люциферазы показана эффективная трансфекция при помощи рецептор-опосредованного переноса генов. Для трансфекции была использована конструкция, состоящая из биотинилированного инсулина в качестве эндоцитируемого лиганда, конъюгата стрептавидин-полилизин, биотинилированного аденовируса для транспорта ДНК из эндосом и плазмиды. При помощи видеоинтенсификационной микроскопии, а также по ингибированию процесса избытком свободного инсулина либо моноклональными антителами против инсулина показано, что ДНК-переносящая конструкция проникает в клетки при помощи рецептор-опосредованного эндоцитоза, и перераспределяется в них за счет эндосомолитического компонента - аденовируса. Проведено исследование влияния заряда ДНК-переносящей конструкции, который меняли при помощи изменения соотношения аминогрупп полилизина и фосфатов ДНК, на эффективность переноса генетического материала в клетки. Показано, что оптимальная трансфекция достигается при соотношении лизин : нуклеотид = 2 для трансфекции клеток НС-11 и соотношении лизин : нуклеотид = 9 для трансфекции клеток PLC/PRF/5. Продемонстрировано, что эффективность трансфекции клеток разного типа несущих один и тот же эндоцитируемый рецептор определяется не только наличием лиганда в составе ДНК-переносящей конструкции, но также и ее общим зарядом.