ВЛИЯНИЕ ЗАМЕН КОНСЕРВАТИВНЫХ НЕФУНКЦИОНАЛЬНЫХ АМИНОКИСЛОТНЫХ ОСТАТКОВ НА СВОРАЧИВАНИЕ ЦИТОХРОМА C

Латыпов Р. Ф., Долгих Д. А., Родер Х., Птицын О. Б.
Институт белка РАН, 142292 Пущино, Россия; *Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, 117871 Москва, Россия; **Раковый Центр Фокс Чейз, 19111 Филадельфия, Пенсильвания, США
С целью исследования влияния замен консервативных, не несущих функциональной нагрузки аминокислотных остатков на сворачивание цитохрома c были получены и проэкспрессированы соответствующие мутантные варианты гена цитохрома c лошади. Белки исследовались как равновесными, так и кинетическими методами. Было обнаружено, что аминокислотные замены в области контакта N- и C-концевых спиралей значительно снижают конформационную стабильность белка, дестабилизируя преимущественно нативное состояние. С помощью 1H-ЯМР и различных оптических методов было обнаружено накопление интермедиата в равновесии и исследованы его свойства. Кинетические эксперименты с применением сверхбыстрого смешивания позволили установить, что данные мутации не влияют на скорость самой быстрой фазы сворачивания, но замедляют последующие фазы. Обсуждается роль высококонсервативных аминокислотных остатков в сворачивании белка.