ВЛИЯНИЕ ЗАМЕН КОНСЕРВАТИВНЫХ НЕФУНКЦИОНАЛЬНЫХ АМИНОКИСЛОТНЫХ ОСТАТКОВ НА СВОРАЧИВАНИЕ ЦИТОХРОМА C
Латыпов Р. Ф., Долгих Д. А., Родер Х., Птицын О. Б.
Институт белка РАН, 142292 Пущино, Россия; *Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, 117871 Москва, Россия; **Раковый Центр Фокс Чейз, 19111 Филадельфия, Пенсильвания, США
С целью исследования влияния
замен консервативных, не несущих функциональной нагрузки аминокислотных
остатков на сворачивание цитохрома c были получены и проэкспрессированы
соответствующие мутантные варианты гена цитохрома c лошади.
Белки исследовались как равновесными, так и кинетическими методами.
Было обнаружено, что аминокислотные замены в области контакта
N- и C-концевых спиралей значительно снижают конформационную стабильность
белка, дестабилизируя преимущественно нативное состояние. С помощью
1H-ЯМР и различных оптических методов было обнаружено
накопление интермедиата в равновесии и исследованы его свойства.
Кинетические эксперименты с применением сверхбыстрого смешивания
позволили установить, что данные мутации не влияют на скорость
самой быстрой фазы сворачивания, но замедляют последующие фазы.
Обсуждается роль высококонсервативных аминокислотных остатков
в сворачивании белка.