ВЛИЯНИЕ ХИНОНОВ И ФЕНОЛОВ НА ТРИФЕРМЕНТНУЮ БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНУЮ СИСТЕМУ С УЧАСТИЕМ ПРОТЕАЗЫ
Реммель Н. Н., Есимбекова Е. Н., Кудряшева Н. С., Кратасюк В. А.
Институт биофизики СО РАН, 660036 Академгородок, Красноярск
Исследовано действие ряда
фенолов и хинонов (бензохинон, тимохинон, толухинон, нафтохинон,
1,4-антрахинон, 9,10-антрахинон, гидрохинон, резорцин, тетрахлорпирокатехин,
диоксибензойная кислота, кофейная кислота) на ферментативную биолюминесцентную
систему: NADH:FMN-оксидоредуктаза -люцифераза, включающую
трипсин. Данная биолюминесцентная триферментная система используется
для определения активности протеаз и антипротеаз. В присутствии
различных концентраций хинонов и фенолов определяли изменение
таких кинетических параметров биолюминесценции, как интенсивность
люминесценции, индукционный период, время выхода на максимум,
константа спада. Проведено сравнение с изменением аналогичных
параметров биферментной системы: NADH:FMN-оксидоредуктаза -
люцифераза. Значительные изменения кинетических параметров наблюдались
в присутствии хинонов; при добавлении в систему фенолов достоверных
изменений параметров не наблюдали. Показано, что изменение интенсивности
люминесценции, индукционного периода и времени выхода на максимум
аналогично изменениям в биферментной системе, однако константа
спада биолюминесценции в триферментной системе в большей степени
зависела от концентрации хинонов. Чувствительность определения
хинонов по константе спада достигала 10-7 М, что на
порядок превышает чувствительность биферментной системы. Таким
образом, показано, что хиноны как окислители воздействуют независимо
на сопряженную биферментную систему NADH - FMN - оксидоредуктаза -
люцифераза и на молекулу трипсина, следовательно, определение
активности трипсина (а также других протеаз и антипротеаз) биолюминисцентным
методом следует проводить и сопоставлять для сред с одинаковыми
окислительно-восстановительными характеристиками.