ВЛИЯНИЕ ХИНОНОВ И ФЕНОЛОВ НА ТРИФЕРМЕНТНУЮ БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНУЮ СИСТЕМУ С УЧАСТИЕМ ПРОТЕАЗЫ

Реммель Н. Н., Есимбекова Е. Н., Кудряшева Н. С., Кратасюк В. А.
Институт биофизики СО РАН, 660036 Академгородок, Красноярск
Исследовано действие ряда фенолов и хинонов (бензохинон, тимохинон, толухинон, нафтохинон, 1,4-антрахинон, 9,10-антрахинон, гидрохинон, резорцин, тетрахлорпирокатехин, диоксибензойная кислота, кофейная кислота) на ферментативную биолюминесцентную систему: NADH:FMN-оксидоредуктаза -люцифераза, включающую трипсин. Данная биолюминесцентная триферментная система используется для определения активности протеаз и антипротеаз. В присутствии различных концентраций хинонов и фенолов определяли изменение таких кинетических параметров биолюминесценции, как интенсивность люминесценции, индукционный период, время выхода на максимум, константа спада. Проведено сравнение с изменением аналогичных параметров биферментной системы: NADH:FMN-оксидоредуктаза - люцифераза. Значительные изменения кинетических параметров наблюдались в присутствии хинонов; при добавлении в систему фенолов достоверных изменений параметров не наблюдали. Показано, что изменение интенсивности люминесценции, индукционного периода и времени выхода на максимум аналогично изменениям в биферментной системе, однако константа спада биолюминесценции в триферментной системе в большей степени зависела от концентрации хинонов. Чувствительность определения хинонов по константе спада достигала 10-7 М, что на порядок превышает чувствительность биферментной системы. Таким образом, показано, что хиноны как окислители воздействуют независимо на сопряженную биферментную систему NADH - FMN - оксидоредуктаза - люцифераза и на молекулу трипсина, следовательно, определение активности трипсина (а также других протеаз и антипротеаз) биолюминисцентным методом следует проводить и сопоставлять для сред с одинаковыми окислительно-восстановительными характеристиками.