ОБРАЗОВАНИЕ КОМПЛЕКСОВ ПОЛИНУКЛЕОТИДОВ С ЛИПОСОМАМИ ИЗ ФОСФАТИДИЛХОЛИНА В ОТСУТСТВИЕ ДВУХВАЛЕНТНЫХ КАТИОНОВ ПО ДАННЫМ МИКРОКАЛОРИМЕТРИИ И ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ
Кувичкин В. В., Емельяненко В. И., Кузнецова С. М., Петров А. И., Жданов Р. И.
Институт биофизики клетки РАН, , 142292 Пущино; *Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, 142292 Пущино; **ИБМХ, 119832 Москва
Известно, что полинуклеотиды
образуют комплексы с цвиттерионными липосомами в присутствии катионов
Me2+. Ранее было показано образование комплексов между
ДНК и фосфолипидами в 70% спиртовом растворе. В настоящей работе
методом микрокалориметрии показано образование комплексов: поли(А)*поли(У)
и липосом из димиристоилфосфатидилхолина (ДМФХ) и дипальмитоилфосфатидилхолина
(ДПФХ), Sigma, гомогенные по данным проведенного нами анализа
методом ТСХ. ПолиА и поли(У) фирмы "Reanal" с М.м. около
5х104 Да подвергались очистке от низкомолекулярных
примесей на колонке с сефадексом G-25 с последующей лиофилизацией
препаратов. Навески лиофилизованных поли А и поли(У) растворяли
с исходной концентрацией 4мМ (в пересчете на основание) в буфере,
состоящем из 10 мМ HEPES, pH 7,2, 10 мМ NaCl. Липосомы из ДМФХ
готовили методом ультразвуковой обработки, а липосомы из ДПФХ
- методом этанольной инжекции. Комплексы липосомы- поли(А)*поли(У)
выдерживали не менее 30 мин перед опытом. Измерения проводили
с помощью микрокалориметра ДАСМ-4. В комплексе поли(А)*поли(У)
+ липосомы из ДПФХ оба компонента плавятся в районе 40 °С, и только
незначительный сдвиг в Тm такого комплекса по
сравнению с Tm кривой плавления суммой индивидуальных
компонент, взятых в том же соотношении, указывает на существование
взаимодействия между компонентами комплекса и в отсутствие ионов
Mg2+. Об этом же свидетельствуют данные электронной
микроскопии комплексов поли(А)*поли(У) - липосомы из
ДПФХ, где видно образование стопок липосом и других агрегатов.
В комплексах поли(А)*поли(У)-липосомы из ДМФХ, у которого
Tm= 21,4°С наблюдаемое изменение формы кривой
плавления наряду с незначительным сдвигом Tm в
сторону увеличения подтверждает наличие взаимодействия
между липосомами и поли(А)*поли(У) в отсутствие ионов
Mg2+. Обсуждается роль фосфолипид-нуклеиновых взаимодействий
в функционировании клетки.