ПРИНЦИПЫ СКРИНИНГА ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ МАРКЕРОВ СТРУКТУРНОГО СОСТОЯНИЯ И СВЯЗЫВАЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ БЕЛКОВ

Гаврилов В. Б., Конев С. В.
Институт фотобиологии НАНБ, 220072 Минск, Беларусь
На примере взаимодействия флуоресцентных зондов (ФЗ) 8-анилинонафталинсульфоната (АНС), пирронового красного (ПК) и карбоксифенилимида диметиламинонафталиндикарбоновой кислоты (К35) с сывороточным альбумином человека (САЧ) предложена поэтапная схема скрининга флуоресцентных маркеров структурного состояния и связывающей способности белков, основанная на определении чувствительности флуоресцентной детекции ФЗ и их сродства к гидрофобным центрам связывания белка. Эта схема включает: 1) использование в качестве эталонов зонда АНС и белка САЧ; 2) определение спектрального положения максимума возбуждения и испускания флуоресценции ФЗ в комплексе с белком; 3) измерение параметров связывания ФЗ с белком методом двойного флуориметрического титрования; 4) оценку белок-зависимой активации флуоресценции в режимах избытка белка и зонда и расчет показателей флуоресцентной детекции ФЗ; 5) классификацию ФЗ как маркеров структурного состояния белков. Показателями чувствительности и специфичности ФЗ при этом служат активация флуоресценции зонда в условиях избытка белка и константа его связывания с сильным высокоаффинным центром сорбции белка; 6)Классификацию ФЗ как маркеров связывающей способности, характеризуемых по белок-зависимому усилению флуоресценции в условиях избытка зонда и по константе его связывания со слабыми вторичными центрами связывания белка. Зонд ПК по своим связывающим характеристикам может рассматриваться как длинноволновый "красный" аналог АНС.