ИЗОТОПНЫЕ ЭФФЕКТЫ ОКСИДА ДЕЙТЕРИЯ В ТЕРМОСТАБИЛЬНОСТИ БЕЛКОВ. МОДЕЛЬ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОЙ ГИДРАТАЦИИ
Лобышев В. И.
Физический факультет. М ГУ им. М.В. Ломоносова 119899 Москва
Помещение белков в оксид
дейтерия (тяжелую воду) сопровождается увеличением их термостабильности
на 2 - 6 градусов, а зависимость температуры денатурации
от доли тяжелой воды в растворе нелинейна. Проанализированы факторы,
обеспечивающие увеличение термостабильности белков в тяжелой воде.
Проведенный анализ указывает на существенную роль воды, специфически
связанной с биополимером более чем одной водородной связью. Судя
по характеру нелинейности - быстрому увеличению температуры
денатурации при малых добавках тяжелой воды - тяжелая вода
по сравнению с обычной водой предпочтительно связывается белком.
Форма кривых зависит от исследуемого белка и варьирует от выпуклой
до S-образной.
Экспериментально исследованы: коллаген, рибонуклеаза, лизоцим,
химотрипсиноген, цитохром с, А-белок - поверхностный
клеточный белок из бактерий Aeromonas salmonicida.
А-белок образует упорядоченную сеть на поверхности бактериальной
клетки и обеспечивает ее вирулентность. Это глобулярный белок
с молекулярным весом 49 кДа, отличающийся большим количеством
гидрофобных аминокислот. Его тепловая денатурация характеризуется
большим скачком теплоемкости, а зависимость температуры денатурации
от доли тяжелой воды в растворе имеет S-образный характер в отличие
от других белков. Величины энтальпии и энтропии денатурации всех
белков в обычной и тяжелой воде, а также плавления льда ложатся
на одну прямую графика компенсационной зависимости, а расстояние
между соответствующими точками одного белка в обычной и тяжелой
воде характеризует количество молекул воды, вовлеченных в денатурационный
процесс. Наибольшим количеством "плавящейся" воды при
денатурации обладает коллаген, что соответствует наличию спиральной
водной структуры у трехспиральной молекулы коллагена. Рассмотрены
при минимальном количестве предположений модели с одним и двумя
центрами связывания воды, существенной для термостабильности нативного
биополимера. Получены нелинейные зависимости температуры денатурации
от концентрации дейтерия в смесях обычной и тяжелой воды. Форма
кривых зависит от соотношения констант связывания ОН-
и OD-
групп. Наилучшим образом экспериментальные кривые описываются
двухцентровой моделью связывания с предпочтительным связыванием
тяжелого изотопа. Необходимость участия двух групп, либо их комбинаций
свидетельствует об участии водных мостиков в стабилизации нативной
структуры белков. В силу общности постулатов, использованных при
построении моделей, они могут быть использованы для анализа других
задач, включающих температурные переходы.