Мажуль И., Дуден Р., Штрауб М., Хелл С., Зелинг Х.-Д.
Институт биофизической химии Макса Планка, Гёттинген, Германия; *Лаборатория клеточной био л огии, Кембриджский университет, Британия
Сложная организация
эукариотических
к
леток требует налаженных механизмов
внутриклеточного везикулярного транспорта. Новейшие исс
ледования
показали, что механизмы, лежащие в основе таких функционально
важных процессов как
эндо- и
экзоцитоз
уникальны и, сохранившись в процессе эволюции, эффективно действуют
как в клетке дрожжей, так и в нейроне гиппокампа. Как
эндоцитоз
лиганд-рецепторного комплекса с
поверхности плазматической мембраны, так и транспорт вновь синтезируемых
секреторных белков из эндоплазматического ретикулума через цис-,
медиал-, транс- Гольджи к поверхности плазматической мембраны
осуществляются в везикулах. Транспортные
везикулы формируются
и отпочковываются от донорной мембраны и после осуществления раунда
внутриклеточного транспорта сливаются с акцепторной мембраной.
Специализированные белки цитоплазмы покрывают вновь образованные
везикулы. Согласно современным представлениям, формирование транспортной
везикулы на мембране внутриклеточного
компартмента
начинается после взаимодействия белков, переносимых везикулой,
с трансмембранным рецептором. Изменение структурного состояния
связанного рецептора может распознаваться цитоплазматическими
белками, которые ассоциируются с мембраной и инициируют образование
транспортной везикулы. Здесь мы использовали
флюоресцентный
резонансный перенос энергии
(ФРПЭ)
как метод регистрации белок-белковых взаимодействий, образования
межмолекулярных комплексов и оценки расстояния между мо
лекулами
на транспортной везикуле с применением двухфотонного возбуждения
хромофоров - рекомбинантных белков транспортных везикул и
спектральных мутантов зеленого флюоресцирующего белка, образующих
донорно-акцепторные пары в живой клетке и позволяющих производить
во времени регистрацию процессов, индуцированных транспотом токсина
в различных внутриклеточных компартментах. Результаты этих исследований
будут представлены в данной работе.