В культурах дефектных по экспрессии эндогенного коннексина клеток HeLa, трансфицированных генами коннексинов Сх32 и Сх26 (HeLa-Cx32 и HeLa-Cx26), исследовали зависимость межклеточной связи от клеточной плотности и рН. Проницаемость щелевых контактов оценивали методом внутриклеточных инъекций флуоресцентного красителя люциферового желтого. При культивировании в среде DMEM с Н₂СО₃/СО₂ буфером, проницаемость контактов снижалась при увеличении клеточной плотности, что сопровождалось снижением рН культуральной среды (рН_ср). При рН_ср 6,7 связь в HeLa-Cx32 блокировалась практически полностью, в HeLa-Cx26 сохранялась в среднем на уровне семи окрашенных соседних клеток. При ежедневной смене среды клеточная плотность удваивалась. При этом происходило незначительное снижение связи в обоих Сх-трансфектантах. Уровень связи почти не изменялся и при использовании фосфатного буфера с Ca²⁺ и Mg²⁺ (PBS²⁺) с рН 6,0. Таким образом, ни абсолютная величина клеточной плотности, ни концентрация Н⁺-ионов во внеклеточной среде не определяют уровень связи в этих культурах. Для проверки роли СО₂ в блоке проницаемости щелевых контактов оценивали диффузию люциферового желтого в растворах с различной концентрацией недиссоциированной угольной кислоты [Н₂СО₃]. Эксперименты показали различие между HeLa-Сх32 и HeLa-Cx26 трансфектантами: клетки HeLа-Cx26 утрачивают связь в растворе с рН₀ 6,5 при 2 мМ [Н₂СО₃], в культуре HeLa-Cx32 связь блокируется только при рН₀ 6,1 и [Н₂СО₃] = [NaHCО₃] ? 5 мМ. Блокирующий эффект полностью обратим при замене растворов на PBS с рН7,5. Изменение внутриклеточного рН (рН_i) было оценено методом поточной цитометрии. Блокирование щелевых контактов в Сх2б трансфектантах происходит при pH_i ? 7,0 при всех тестируемых концентрациях Н2СОз. Ингибирование связи в Сх32 трансфектантах начинается с pHi ? 6,5 независимо от [Н₂СО₃]. Полученные данные показывают, что наблюдаемое при увеличении клеточной плотности и сопутствующем закислении среды ингибирование межклеточной связи не может быть объяснено снижением уровня pH_i. Мы предполагаем, что с увеличением клеточной плотности происходит длительная даун-регуляция контактов, которая может быть связанная с деградацией каналов щелевых контактов в кондиционированной среде и возобновлением их синтеза в свежей среде.