ИСПОЛЬЗОВАНИЕ АНАЛИЗА НЕОДНОРОДНОГО УШИРЕНИЯ СПЕКТРОВ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ ДСМ В ИЗУЧЕНИИ ВОЗРАСТНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ
Нардид О. А., Дюбко Т. С.
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, 310015 Харьков, Украина
В работе исследовали в
сравнительном аспекте структурное состояние мембран эритроцитов
взрослого донора и плода человека с применением модификации метода
флуоресцентных зондов, расширяющей возможности интерпретации результатов
- анализа параметров неоднородного уширения спектров флуоресценции
зонда-катиона ДСМ. Показано, что в физрастворе максимум спектра
флуоресценции ДСМ находится в области 609-610 нм. При встраивании
в мембраны эритроцитов взрослого донора он сдвигается в коротковолновую
сторону до 596 нм с 2-кратным возрастанием интенсивности, в то
время как в мембранах эритроцитов плода максимум находится в более
коротковолновой области - 590 нм. Анализ параметров неоднородного
уширения спектров позволил достоверно идентифицировать в мембранах
эритроцитов взрослого донора по крайней мере три типа центров
сорбции зонда, различающихся по полярности и подвижности его ближайшего
микроокружения: участками связывания ДСМ, расположенными на поверхности
(тип I), характеризующихся наименьшими значениями параметров
nс1
= 15532 см-1; участками связывания, с промежуточными
значениями nс2
= 17050 см-1 (тип П) и участками, характеризующимися
наибольшими значениями nс3=
18560 см-1 (тип III). При этом наибольший вклад
в суммарный спектр вносят молекулы зонда, сорбированные в поверхностных
центрах. Предполагается, что участки сорбции типа I представляют
собой отрицательно заряженные группы липидов и белков на поверхности
эритроцита, участки типа II
близки к ним по параметрам и характеризуют связывание зонда с
неполярными приповерхностными областями липидов и белков, а участки
типа Ш соответствуют более глубокой локализации зонда в мембране,
находящегося в местах белок-липидных контактов либо в области
жирнокислотных цепочек липидов. В мембранах эритроцитов плода
преимущественно обнаруживаются центры сорбции типов I и II
(nс1
= 15530 и nс2;
= 17130 см-1),
в то время как вклад центров сорбции типа Ш (nс3=
18725 см-1) не превышает 5%. Таким образом, полученные
результаты свидетельствуют о высокой чувствительности использованного
подхода к изменениям структурного состояния биомембран и могут
свидетельствовать в пользу его применения при оценке воздействия
на эритроциты как различных онтогенетических, физико-химических,
так и патологических состояний эритроцита.