ИСПОЛЬЗОВАНИЕ АНАЛИЗА НЕОДНОРОДНОГО УШИРЕНИЯ СПЕКТРОВ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ ДСМ В ИЗУЧЕНИИ ВОЗРАСТНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ

Нардид О. А., Дюбко Т. С.
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, 310015 Харьков, Украина
В работе исследовали в сравнительном аспекте структурное состояние мембран эритроцитов взрослого донора и плода человека с применением модификации метода флуоресцентных зондов, расширяющей возможности интерпретации результатов - анализа параметров неоднородного уширения спектров флуоресценции зонда-катиона ДСМ. Показано, что в физрастворе максимум спектра флуоресценции ДСМ находится в области 609-610 нм. При встраивании в мембраны эритроцитов взрослого донора он сдвигается в коротковолновую сторону до 596 нм с 2-кратным возрастанием интенсивности, в то время как в мембранах эритроцитов плода максимум находится в более коротковолновой области - 590 нм. Анализ параметров неоднородного уширения спектров позволил достоверно идентифицировать в мембранах эритроцитов взрослого донора по крайней мере три типа центров сорбции зонда, различающихся по полярности и подвижности его ближайшего микроокружения: участками связывания ДСМ, расположенными на поверхности (тип I), характеризующихся наименьшими значениями параметров nс1 = 15532 см-1; участками связывания, с промежуточными значениями nс2 = 17050 см-1 (тип П) и участками, характеризующимися наибольшими значениями nс3= 18560 см-1 (тип III). При этом наибольший вклад в суммарный спектр вносят молекулы зонда, сорбированные в поверхностных центрах. Предполагается, что участки сорбции типа I представляют собой отрицательно заряженные группы липидов и белков на поверхности эритроцита, участки типа II близки к ним по параметрам и характеризуют связывание зонда с неполярными приповерхностными областями липидов и белков, а участки типа Ш соответствуют более глубокой локализации зонда в мембране, находящегося в местах белок-липидных контактов либо в области жирнокислотных цепочек липидов. В мембранах эритроцитов плода преимущественно обнаруживаются центры сорбции типов I и II (nс1 = 15530 и nс2; = 17130 см-1), в то время как вклад центров сорбции типа Ш (nс3= 18725 см-1) не превышает 5%. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о высокой чувствительности использованного подхода к изменениям структурного состояния биомембран и могут свидетельствовать в пользу его применения при оценке воздействия на эритроциты как различных онтогенетических, физико-химических, так и патологических состояний эритроцита.