СВЯЗЫВАНИЕ ИОНОВ ЦИНКА С ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗОЙ ИЗ МЫШЦЫ СВИНЬИ. МИКРОКАЛОРИМЕТРИТРИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Биркая В. Г., Монаселидзе Д. Р.
Институт физики АН Грузии, Тбилиси
Было показано, что ЛДГ М4 из мышцы свиньи ингибируется специфическим связыванием ионов цинка (Биркая, и др., 1990. Биофизика, 35, 579-580). Данные равновесного диализа показывают один ион цинка на субъединицу с Кd=1мкМ. Показано, что ионы магния до 1мМ не влияют на ингибирование цинком. Показано, что тепловая денатурация в области рН раствора 6,5 - 8,25 и концентрации полимера 0,05 - 04, % в термодинамическом отношении преставляет собой один конформационный переход, при котором все четыре субъединицы плавятся как одна кооперативная система. При рН 7,5 параметры перехода равны DТd =3,20С, D Н = 24 Дж/гр, Тd = 570 С. Отношение DHcal/DНeff = 4,05 ± 0.5 для всех исследуемых нами рН и указывает на то, что в тетрамере все полипетидные цепи плавятся независимо друг от друга по принципу все или ничего. Увеличение концентрации полимера от 0,4 до 2,4 % приводит к нарушению симметрии и сужению пика теплопоглощения, и его плавление напоминает плавление истинных белковых кристаллов (Н.Г.Есипова и др. 1978. Мол. биол., 12, 1152). Добавленные ионы цинка связываются с молекулой двумя способами - слабым и сильным. При рН 7,5 сильное связывание осуществляется только с одной цепью, а слабое с димером. В случае рН 8,25 способ сильного связывания не меняется, а слабое осуществляется только с одной цепью. Показано также, что ионы цинка, понижая Тd и увеличивая DТd мономерных цепей, с которыми они связываются, не влияют на доменную структуру фермента, тогда как количество кооперативно плавящихся областей увеличивается при денатурации от одного до трех и зависит от количества специфически связанных макромолекулой ионов цинка.