МЕТОД ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНОЙ ВАКУУМНОЙ ВСПЫШКИ
Журавлев А. И.
(Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии, кафедра биофизики, 109472 Москва
Метод выявляет степень
дисоциации в вакууме нестойких веществ до активных свободных радикалов,
способных вступать в быстрые реакции с кислородом с образованием
электронных возбужденных состояний и спонтанной хемилюминесценции.
Субстраты - липиды, липидные препараты и другие вещества,
способные к автоокислению. Подготовка к измерению. Препараты
помещаются в стеклянные емкости (пробирки, пузырьки...) и запаиваются
лучше под вакуумом. В замкнутом сосуде небольшой объем кислорода
воздуха быстро связывается субстратом и создается пониженное парциальное
давление кислорода или вакуум. Запаенные образцы хранятся в темноте
различные сроки при различных температурах от 0 до 60°С. Условия
измерения. Измерение спонтанной хемилюминесценции проводят
в темноте до запаивания, до и сразу после нарушения герметичности.
Время измерения зависит от динамики измерений. Измерения проводят
при температуре 37°С (от 20 до 60°С) в темноте, на установке для
измерения сверхслабых световых потоков по методу Б.Н.Тарусова
(Биофизика, 1961, №4, с.490-492; Биофизика, 1991, №3, с.489-496).
В исходном состоянии липидные препараты, например, рыбий жир,
спонтанно хемилюминесцируют с интенсивностью @ n.102
квант/сек.см2; в герметическом сосуде интенсивность
свечения падает ниже порога чувствительности установки @ n.101
квант/сек.см2. После вскрытия сосуда и доступа
кислорода воздуха в течении 1-2 минут наблюдается резкое, в 10-100
раз усиление (вспышка) хемилюминесценции. Амплитуда вспышки медленно
за 30-60 минут снижается до уровня близкого к исходному. Амплитуда
вспышки пропорциональна исходному содержанию перекисей, времени
и температуре хранения. Метод характеризует устойчивость препарата
к хранению в вакууме. Проверка образцов длительного хранения медицинского
рыбьего жира показала возникновение "мощных" вспышек,
т.е. высоких концентраций свободных радикалов, что и является
основой их токсичности и отравления детей при употреблении таких
длительно хранящихся препаратов. Показано, что длительное хранение
в вакууме или в герметичной таре не сохраняет липидные образцы
от разложения.