Митохондриальная NАDН:убихинон-оксидоредуктаза (ЕС 1.6.5.3, Комплекс I), катализирует энергопреобразующую реакцию: NADH + Q + Н + nН⁺_m - NAD⁺ + QH₂ + nH⁺_c (1) где Q и QH₂ - окисленный и восстановленный внутримембранный убихинон, а nН⁺_m и nH⁺_c - протоны, векторно перенесённые через мембрану. Такая важная характеристика работы фермента, как величина стехиометрии n (отношение >Н⁺/2е^-) до сих пор остается предметом дискуссий [Brandt, 1997]. Отношение >Н⁺/2е^- было определено с использованием быстрореагирующего рН-электрода на препарате Комплекса I митохондрий сердца крысы, заблокированных цианидом. Фермент, входящий в состав дыхательной цепи, осуществлял чувствительный к разобщителю векторный перенос протонов наружу при восстановлении известного количества Q₁ внутримитохондриальным NADH. Быстрое закисление среды инкубации после внесения добавки Q₁ сменялось медленным возвращением рН к начальному уровню. Величина стехиометрии, равная 3,93 Н⁺/2е^-, была определена стандартной методикой по величине пика [Lawford, Garland, 1972]. Хорошо сопряжённые субмитохондриальные частицы из митохондрий сердца быка, заблокированные на уровне bc₁ комплекса, катализировали быструю, чувствительную к разобщителю реакцию переноса протонов внутрь везикул в процессе окисления известного количества NADH экзогенным Q₁. Наружное защелачивание, внутреннее закисление и кинетика окисления NADH регистрировались спектрофотометрически. Вычисление стехиометрии через отношение начальных скоростей защелачивания среды инкубации и окисления NADH даёт величину 4,0 Н⁺ векторно переносимых через мембрану на 1 моль окисленного NADH. ADP-рибоза, конкурентный по отношению к NADH ингибитор, понижал скорость транслокации протонов и окисления NADH, не влияя на величину >Н⁺/2е^-. Ротенон и пиерицидин А полностью блокировали перенос электронов от NADH на эндогенный Q₁₀, тогда как NADH:Q₁-редуктазная реакция тормозилась лишь частично и была сопряжена с переносом протонов с величиной стехиометрии, также равной 4 Н⁺/2е^-. Исходя из того, что определённая нами стехиометрия работы Комплекса I не меняется в присутствии ротенона, можно говорить о том, что Q₁ взаимодействует с терминальным редокс-компонентом фермента, который находится уже после всех протонпереносящих механизмов.