ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИЙ МЕТОД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СКОРОСТИ ХОЛИНЭСТЕРАЗНОГО ГИДРОЛИЗА ТИОХОЛИНОВЫХ ЭФИРОВ КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ

Жуковский Ю. Г., Кузнецова Л. П., Сочилина Е. Е., Быковская Е. Ю.
Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН, 195273 Санкт-Петербург
При постоянной силе тока, проходящего через два платиновых электрода (анод и катод), помещённых вместе с электродом сравнения в буферный раствор йодистого тиохолинового эфира карбоновой кислоты, регистрировали потенциал анода относительно потенциала электрода сравнения. Начальная величина потенциала платинового анода (395 мВ) определяется концентрацией анионов йода и почти не зависит от величины рН (5,0-9,0), величины силы тока (4,4-6,4 мкА), концентрации хлористого калия (0-0,1 моль/л) и концентрации фосфатного буфера (4-100 ммоль/л). После добавления холинэстеразы начинается ферментативный гидролиз тиохолинового эфира и образуется тиохолин, в результате чего потенциал платинового анода уменьшается. Скорость уменьшения потенциала пропорциональна каталитической активности холинэстеразы, при оптимальной для этой активности величине рН 7,5-8,5. Из трёх испытанных тиохолиновых эфиров (ацетилтиохолин, пропионилтиохолин и бутирилтиохолин) в опытах с бутирилхолинэстеразой (НФ 3.1.1.8) из сыворотки крови человека, лошади, голубя, костистой рыбы синца быстрее всех гидролизовался бутирилтиохолин; в опытах с пропионилхолинэстеразой (НФ 3.1.1.8) из мозговой ткани или сыворотки крови - пропионилтиохолин; а в опытах с ацетилхолинэстеразой (НФ 3.1.1.7) из эритроцитов крови человека, быка, лошади, а также из электрической ткани электрического угря и электрического ската - ацетилтиохолин, тогда как бутирилтиохолин не гидролизовался. Способ характеризуется высокой чувствительностью определения холинэстеразной активности и позволяет определять её не только у водорастворимых препаратов, но и у гомогенатов тканей. Он может быть применён в стационарных и передвижных лабораториях служб контроля для определения микроконцентраций антихолинэстеразных соединений (пестицидов и лекарственных веществ). Большинство испытанных примесей (соли тяжёлых металлов,