ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИЙ МЕТОД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СКОРОСТИ ХОЛИНЭСТЕРАЗНОГО ГИДРОЛИЗА ТИОХОЛИНОВЫХ ЭФИРОВ КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ
Жуковский Ю. Г., Кузнецова Л. П., Сочилина Е. Е., Быковская Е. Ю.
Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН, 195273 Санкт-Петербург
При постоянной силе тока,
проходящего через два платиновых электрода (анод и катод), помещённых
вместе с электродом сравнения в буферный раствор йодистого тиохолинового
эфира карбоновой кислоты, регистрировали потенциал анода относительно
потенциала электрода сравнения. Начальная величина потенциала
платинового анода (395 мВ) определяется концентрацией анионов
йода и почти не зависит от величины рН (5,0-9,0), величины силы
тока (4,4-6,4 мкА), концентрации хлористого калия (0-0,1 моль/л)
и концентрации фосфатного буфера (4-100 ммоль/л). После добавления
холинэстеразы начинается ферментативный гидролиз тиохолинового
эфира и образуется тиохолин, в результате чего потенциал платинового
анода уменьшается. Скорость уменьшения потенциала пропорциональна
каталитической активности холинэстеразы, при оптимальной для этой
активности величине рН 7,5-8,5. Из трёх испытанных тиохолиновых
эфиров (ацетилтиохолин, пропионилтиохолин и бутирилтиохолин) в
опытах с бутирилхолинэстеразой (НФ 3.1.1.8) из сыворотки крови
человека, лошади, голубя, костистой рыбы синца быстрее всех гидролизовался
бутирилтиохолин; в опытах с пропионилхолинэстеразой (НФ 3.1.1.8)
из мозговой ткани или сыворотки крови - пропионилтиохолин;
а в опытах с ацетилхолинэстеразой (НФ 3.1.1.7) из эритроцитов
крови человека, быка, лошади, а также из электрической ткани электрического
угря и электрического ската - ацетилтиохолин, тогда как бутирилтиохолин
не гидролизовался. Способ характеризуется высокой чувствительностью
определения холинэстеразной активности и позволяет определять
её не только у водорастворимых препаратов, но и у гомогенатов
тканей. Он может быть применён в стационарных и передвижных лабораториях
служб контроля для определения микроконцентраций антихолинэстеразных
соединений (пестицидов и лекарственных веществ). Большинство испытанных
примесей (соли тяжёлых металлов,