СТРУКТУРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ХРОМАТИНА ПРИ ДЕЙСТВИИ ЦИКЛОГЕКСИМИДА, ВЫЯВЛЯЕМЫЕ ДЕЙСТВИЕМ ЭКЗОГЕННОЙ И ЭНДОГЕННОЙ ДНКАЗ
Терентьев А. А., Бойков П. Я., Кузнецова Л. В., Глебова Ю. С.
Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка Московской обл.
Исследованы изменения
в структуре хроматина гепатоцитов под действием ингибитора трансляции
циклогексимида (ЦГИ) с помощью двух разных нуклеаз - экзогенной
ДНКазы I (10 ед/1000 мкг ядер) и эндогенной Ca2+/Mg2+-зависимой
эндонуклеазы (СМЭ). Чувствительность хроматина к ДНКазам определяли
по выходу кислоторастворимой фракции ДНК. Показано, что ЦГИ вызывает
разнонаправленные изменения в действии двух ДНКаз на хроматин
гепатоцитов. В случае эндогенной СМЭ выход кислоторастворимой
ДНК снижается через 1 ч действия ЦГИ в 2 раза по сравнению с контролем
и остается на данном уровне до 6 ч действия ЦГИ. ЦГИ-зависимые
изменения в чувствительности хроматина, к ДНКазе I носят более
сложный характер. Во-первых, чувствительность хроматина к ДНКазе
I повышается при действии ЦГИ через 1 ч после введения ЦГИ и увеличивается
в 2 раза по сравнению с контролем в период 3-6 ч действия ЦГИ.
Кроме того, через 3 ч после введения ЦГИ скорость накопления кислоторастворимой
ДНК повышается в 2 раза по сравнению с контролем, после чего (к
6 ч действия ЦГИ) скорость накопления кислоторастворимой ДНК снижается.
Электрофорез ДНК, очищенной из ядер гепатоцитов после нуклеазной
обработки хроматина, показал, что основное накопление фрагментов
размером 200 - 2000 п.н. происходит на самых начальных этапах
гидролиза (через 5 мин для СМЭ и через 1 мин для ДНКазы I). При
обработке ядер гепатоцитов СМЭ наблюдается понижение относительного
количества фрагментов ДНК в 200-2000 п.н. при действии ЦГИ, тогда
как при обработке хроматина ДНКазой I выраженной динамики в накоплении
гидролизованной ДНК не наблюдается. Электрофорез ДНК также показал,
что при обработке хроматина гепатоцитов ДНКазой I в основном наблюдается
неспецифический гидролиз ДНК до фрагментов размером 100-700 п.н.
Однако через 3 ч действия ЦГИ обнаруживаются специфичные фрагменты
ДНК, соответствующие по распределению нуклеосомным фрагментам
ДНК. Действие СМЭ связано, помимо накопления гидролизованной ДНК,
с постепенным укорочением нуклеосомных фрагментов ДНК в связи
с углублением гидролиза хроматина.