СТРУКТУРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ХРОМАТИНА ПРИ ДЕЙСТВИИ ЦИКЛОГЕКСИМИДА, ВЫЯВЛЯЕМЫЕ ДЕЙСТВИЕМ ЭКЗОГЕННОЙ И ЭНДОГЕННОЙ ДНКАЗ

Терентьев А. А., Бойков П. Я., Кузнецова Л. В., Глебова Ю. С.
Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка Московской обл.
Исследованы изменения в структуре хроматина гепатоцитов под действием ингибитора трансляции циклогексимида (ЦГИ) с помощью двух разных нуклеаз - экзогенной ДНКазы I (10 ед/1000 мкг ядер) и эндогенной Ca2+/Mg2+-зависимой эндонуклеазы (СМЭ). Чувствительность хроматина к ДНКазам определяли по выходу кислоторастворимой фракции ДНК. Показано, что ЦГИ вызывает разнонаправленные изменения в действии двух ДНКаз на хроматин гепатоцитов. В случае эндогенной СМЭ выход кислоторастворимой ДНК снижается через 1 ч действия ЦГИ в 2 раза по сравнению с контролем и остается на данном уровне до 6 ч действия ЦГИ. ЦГИ-зависимые изменения в чувствительности хроматина, к ДНКазе I носят более сложный характер. Во-первых, чувствительность хроматина к ДНКазе I повышается при действии ЦГИ через 1 ч после введения ЦГИ и увеличивается в 2 раза по сравнению с контролем в период 3-6 ч действия ЦГИ. Кроме того, через 3 ч после введения ЦГИ скорость накопления кислоторастворимой ДНК повышается в 2 раза по сравнению с контролем, после чего (к 6 ч действия ЦГИ) скорость накопления кислоторастворимой ДНК снижается. Электрофорез ДНК, очищенной из ядер гепатоцитов после нуклеазной обработки хроматина, показал, что основное накопление фрагментов размером 200 - 2000 п.н. происходит на самых начальных этапах гидролиза (через 5 мин для СМЭ и через 1 мин для ДНКазы I). При обработке ядер гепатоцитов СМЭ наблюдается понижение относительного количества фрагментов ДНК в 200-2000 п.н. при действии ЦГИ, тогда как при обработке хроматина ДНКазой I выраженной динамики в накоплении гидролизованной ДНК не наблюдается. Электрофорез ДНК также показал, что при обработке хроматина гепатоцитов ДНКазой I в основном наблюдается неспецифический гидролиз ДНК до фрагментов размером 100-700 п.н. Однако через 3 ч действия ЦГИ обнаруживаются специфичные фрагменты ДНК, соответствующие по распределению нуклеосомным фрагментам ДНК. Действие СМЭ связано, помимо накопления гидролизованной ДНК, с постепенным укорочением нуклеосомных фрагментов ДНК в связи с углублением гидролиза хроматина.