ВЛИЯНИЕ АЦЕТИЛИРОВАНИЯ И ФОРМАЛЬДЕГИДНЫХ СШИВОК НА СТРУКТУРУ ХРОМАТИНА ЭРИТРОЦИТОВ ЦЫПЛЕНКА. МИКРОКАЛОРИМЕТРИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Маджагаладзе Г., Абуладзe М., Асатиани Н., Бакрадзе Н., Биркая Б., Сапожникова Н., Хачидзе Д., Монаселидзе Д.
Маджагаладзе Г., Абуладзe М., Асатиани Н., Бакрадзе Н., Биркая Б., Сапожникова Н., Хачидзе Д., Монаселидзе Д.
Показано, что хроматин в составе ядер эритроцитов цыпленка в низкосолевом растворе (10 мМ Tris-HCl, 0,25 М сахарозы, 3 мМ MgCl2 pH 7,5) денатурирует трехстадийно. Четвертая и пятая стадии представляют интенсивные пики теплопоглощения с параметрами Td (IV) =82,5°С, DTd(IV)=3,4°С и Qd(IV) =22,6±2,0 Дж/г ДНК; Td (V) = 91,5°С, DTd (v) =10,5°С, Qd(V)=22,6±2,0 Дж/г ДНК. Вторая стадия проявляется только после деконволюции кривой и дает параметры: Td (II)= 70°С, DTd (II) =5,2°С, Qd(II)=4,3±1,5 Дж/г ДНК. Первая и вторая стадии соответствуют плавлению белковых фракций. Установлено, что III стадия отображает денатурацию "голой" ДНК или ДНК, слабо защищенной от негистоновых белков и гистона Н1. IY стадия отображает денатурацию 30 нм фибриллы, а Y стадия- денатурацию более высоких уровней организации хроматина. В 0,35 М NaCl 30 нм фибрилла разворачивается, в результате пик при 82,5°С исчезает, и вместо него появляется пик при 78,5°С с Qd(IVа) =11,7 Дж/гДНК, отображающий денатурацию 10 нм фибриллы. При этом Qd(Ш) увеличивается и составляет величину, равную 11,3 Дж/гДНК, а пик с Тd, равную 91,5°С. Обработка ядер однопроцентным формальдегидом в течение 10 минут при 37 оС вызывает сдвиг IY и Y стадий к высоким температурам. При этом высокотемпературный пик сдвигается сильнее, чем низкотемпературный пик, и составляет DTd =8,5°С. Оказалось, что сшивки белок-белок и белок-ДНК в хроматине, образованные формальдегидом, настолько специфичны и сильны, что кривые теплопоглощения растворов хроматина, обработанные 0,35 М и 0,55 М NaCl не отличаются от кривых интактных ядер. Этот результат также указывает на тот факт, что перераспределение негистоновых белков и гистона Н1, если оно и происходит в процессе нагрева, то не влияет на параметры денатурации хроматина. Обработка ядер бутиратом натрия, который является супрессором активности гистоновых деацетилаз, показала, что натрий бутират так действует на ферменты, что меняется не только стабильность 30 нм фибриллы,в частности Td понижается на 0,8°С и DТ расширяется на 1°С, что можно трактовать как слабое разворачивание нуклеосом в составе 30 нм фибриллы.