ВЫЯВЛЕНИЕ АГРЕГАТНЫХ СОСТОЯНИЙ ДНК-ЛИПИДНЫХ КОМПЛЕКСОВ С ПОМОЩЬЮ МИКРОКАЛОРИМЕТРИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Хусаинова Р. С., Попов В. И., Иваницкий Г. Р., Даусон К. А., Рочев Ю. Л.
Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, 142292 Пущино; * Институт биофизики клетки РАН, 142292 Пущино; **Дублинский Университет-колледж, Ирландия
Для создания эффективных
средств доставки генетического материала внутрь клетки важны структурные
исследования ДНК-липидного взаимодействия. В настоящей работе
проводится сравнительное микрокалориметрическое исследование влияния
ДНК на фазовые переходы многослойных везикул дипальмитоилфосфатидилхолина
(ДПФХ) при разных молярных соотношениях нуклеотид/липид: 1/30
и 1/1. Показано, что при низком молярном соотношении 1/30 мультислойные
везикулы имеют два фазовых перехода: основной фазовый переход
ДПФХ в присутствии Са2+ в области 42,2°С и фазовый
переход провзаимодействовавшего с ДНК посредством катионов Са2+
ДПФХ в области 43,1°С. При эквимолярном соотношении нуклеотид/липид
появляется третий фазовый переход в области 44,1°С. Появление
третьего фазового перехода свидетельствует о наличии в препарате
сильно иммобилизованных молекул ДПФХ. Можно предположить, что
наиболее сильная иммобилизация молекул ДПФХ молекулами ДНК достигается
во внутренних бислоях ДПФХ, заключенных между несколькими молекулами
ДНК в "слоенном пироге" агрегата комплексов. А это означает,
что существование третьего фазового перехода в области 44,1°С
свидетельствует об агрегации комплексов. Данное предположение
подтверждается фотографиями электронной микроскопии и термограммами
микрокалориметрического сканирования. Таким образом, результаты
настоящих исследований позволяют использовать микрокалориметрические
исследования для выявления агрегированного состояния комплексов.
Работа выполнена при финансовой поддержке грантов
INTAS-93-2084,
РФФИ-96-04-48192, РФФИ-97-04-48404.