ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ТЕМПЕРАТУРЫ НА СТРУКТУРНЫЕ СВОЙСТВА ТИТИНА МЕТОДОМ КАЛОРИМЕТРИИ И СОБСТВЕННОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ
Заалишвили Т. М., Ломидзе Л. Г., Гачечиладзе Н. А., Гиуашвили М. А., Махарадзе М. Дж., Геташвили Г. М., Гвритишвили А. Г., Заалишвили М. М.
Институт молекулярной биологии и биофизики АН Грузии, Тбилиси
Использование капиллярного
калориметра ДАСМ-4 исключает эффекты
теплоемкости, связанные с изменением вязкости гигантской молекулы
титина в ходе денатурации. Спектры флуоресценции снимали на особо
чувствительном спектрофлуорометре RF-5000
"Shimadzu".
Скорость нагрева ~1,2
К/мин. Калориметрические измерения производили при скорости прогрева
0,25 К/мин, и концентрации белка 1,5-3 мг/мл. Нативный препарат
титина получали модифицированным методом Триника. Наличие флуоресцирующих
аминокислот дает возможность в пределах концентрации 0,02-0,05
мг/мл исследовать влияние температуры на квантовый выход и положение
спектров флуоресценции при l=
284 нм. Оказалось, что с ростом температуры происходит резкое
изменение квантового выхода в интервале 40-60°С
и сдвиг спектров флуоресценции в длиноволновую область на ~6 нм,
т.е., вероятно, часть внутренних остатков флуоресцирующих аминокислот
переходит на поверхность белковой структуры. Можно предположить,
что в результате тепловой денатурации происходит частичное раскручивание
молекулы титина. Это хорошо согласуется с эластичностью молекулы
титина, что в свою очередь может быть обусловлено (b-складчатой
структурой этого белка. Переход в интервале 40-60°С был зарегистрирован
также калориметрическим методом. Как оказалось, температурная
денатурация титина происходит примерно в том же температурном
интервале (40-80°С). Характеристическая температура перехода Т=59,4°С,
интервал температуры плавления DТ=40°С. Энтальпия Вант-Гоффа ниже
калориметрической энтальпии (ДН=10,9
Дж/г), что указывает на то, что белок имеет термодинамически стабильные
промежуточные состояния.