УСТОЙЧИВОСТЬ ДНК В КОДИРУЮЩИХ ОБЛАСТЯХ ЭКСПРЕССИРУЕМЫХ ГЕНОВ К ДЕЙСТВИЮ МИКРОКОККОВОЙ НУКЛЕАЗЫ И ДНКАЗЫ 1

Прияткина Т. Н., Аридов А. Ф., Садовникова А. О., Дмитриева Д. В.
Кафедра биохимии Санкт-Петербургского университета, 199034 Санкт-Петербург; НИИФ им. А.А. Ухтомского СПбГУ
Необходимой ступенью в исследовании механизмов реализации генетических функций ДНК в хроматине является расшифровка структурных переходов от фибрилл "высшего порядка складывания ДНК" до линеаризации нуклеосом и обратимого освобождения ДНК из комплекса с гистонами. Тестом на репрессированный хроматин является нуклеосомная (200-парная) периодичность в расщеплении ДНК нуклеазами, обусловленная наличием свободных линкеров, связывающих компактные частицы. Организация структурных единиц и характер распределения гистонов на ДНК в различных учасках активных генов остаются неизвестными. Мы исследовали периодичность расщепления ДНК кодирующих областей генов тирозинаминотрансферазы (ТАТ) и триптофаноксигеназы (ТО) микрококковой нуклеазой и ДНКазой 1 в ядрах печени крыс, где они экспрессируются. При используемых нами условиях обе нуклеазы продуцировали типичный спектр дискретных фрагментов с распределением от 170 н.п. до 20000 н.п. ДНК и выше с существенным преобладанием моно- и коротких олигонуклеосом. ДНК из кодирующих областей обоих генов не гибридизовалась с этими короткими фрагментами. Образование гибридов наблюдалось только в зоне высокополимерных компонентов, представленных в гидролизатах в минорном количестве (от 10000 н.п. для ТО-гена и от 5000 н.п. для гена ТАТ). Фланкирующиая ДНК этих генов обнаружила другой характер гибридизации с фрагментами нуклеазного переваривания ДНК ядер печени: распределение гибридов в значительной мере соответствовала распределению суммарной ДНК. Эти данные показывают, что в кодирующих областях генов, дерепрессированных в специализированных клетках, отсутствуют типичные межнуклеосомные линкеры. Устойчивость межнуклеосомных линкеров к действию нуклеаз в кодирующих областях активных генов была показана ранее для генов БТШ, актина и b-глобина (Elgin e.a., 1983; Ridsdale, Davie,1987). Рассматривается модель разворачивания нуклеогистонов, учитывающая потерю чувствительности к нуклеазам межнуклеосомной ДНК.